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CaCl2感受態細胞的制備的實驗步驟2016/5/9
CaCl2感受態細胞的制備的實驗步驟1.前夜接種受體菌(DH5α或DH10B),挑取單菌落于lb培養基中37℃搖床培養過夜(約16小時);2.取1ml過夜培養物轉接于100mlLB培養基中,在37℃搖...
多重PCR反應中關鍵因素與實驗步驟2016/5/3
多重PCR通過在同一個反應中同時完成多個基因的擴增成為臨床與基礎研究領域中一種簡便快捷的篩選檢測方法。已有大量文獻詳細的討論了通常影響PCR反應質量的條件,而在多重PCR中常見的困難和重要的實驗因素卻...
RT實驗方法介紹2016/4/26
1、高質量RNA成功的cDNA合成來自高質量的RNA。高質量的RNA至少應保證全長并且不含逆轉錄酶的抑制劑,如EDTA或SDS。RNA的質量決定了你能夠轉錄到cDNA上的序列信息量的zui大值。一般不...
RT引物設計2016/4/25
首先引物設計引物設計有3條基本原則:首先引物與模板的序列要緊密互補,其次引物與引物之間避免形成穩定的二聚體或發夾結構,再次引物不能在模板的非目的位點引發DNA聚合反應(即錯配)。具體實現這3條基本原則...
RNAi技術概述2016/4/14
1RNA干涉現象的發現及其特點十多年前,科學家在努力進行生物遺傳改良時,發現靶生物體內產生了一種非期望的表型。早期事例來自于兩個獨立的研究團體,一個由美國的Jorgensen所,另一個為荷蘭的Mol所...
RNA提取心得2016/4/6
一.組織RNA提取1.新鮮組織,這樣RNA提取的效果比較好,這是肯定的。2.如果不是新鮮的(在半年之內,-80℃或者液氮中凍存的)組織,注意不要反復凍融,從冰凍狀態拿到0-4℃,注意不要拿到常溫,待組...
測序常見問題分析2016/3/30
1.如何測定引物的OD值?用紫外分光光度計在260nm波長測定溶液的吸光度來定量,請注意紫外分光光度計的使用,測定時溶液的吸光度稀釋到0.2-0.8之間(吸光度太高或太低會有較大的誤差)。DNA干粉用...
基因克隆載體的功能及其特征2016/3/21
一、載體的功能1.運送外源基因轉入受體細胞2.為外源基因提供復制能力或整合能力3.為外源基因的擴增或表達提供條件二、載體應具備的條件1.具有對受體細胞的可轉移性2.具有與特定受體細胞相適應的復制位點或...
分子標記常見問題及其對策2016/3/16
1顯性標記與選擇效率一部分分子標記系統如RAPD、AFLP具有顯性或部分顯性的特點,無法區分基因是純合還是雜合,不能提供完整的遺傳信息。Haley等(1994)提出相斥相(Repulsion-phas...
基因表達差異分析方法進展2016/3/7
高等真核生物的基因組一般具有80000~100000個基因,而每一個細胞大約只表達其中的15%[1]。基因在不同細胞間及不同生長階段的選擇性表達決定了生命活動的多樣性,如發育與分化、衰老與死亡、內環境...
反轉錄差異顯示技術(DDRT2016/2/22
摘要:運用mRNA反轉錄差異顯示技術可以了解不同細胞或同類細胞在不同發育階段、不同生理狀態下的基因表達狀況,為研究生命活動過程提供重要信息。文章對差異顯示反轉錄聚合酶鏈式反應技術的基本原理,優點與缺點...
如何確定轉基因拷貝數?2016/1/27
鑒定轉基因植物的*步就是要確定被轉基因已經穩定的整合到了染色體上。第二步任務就是評估有多少個轉基因拷貝,以及每個轉基因的表達水平如何。一般經過上游表達載體的設計構建以及下游轉化體系的建立、轉化品系的篩...
如何動手合成siRNA2016/1/25
我們開發、優化了一種采用T7RNA聚合酶和退火的DNA寡聚核苷酸模板,體外合成短干擾RNA(siRNA)或發夾siRNA方法。在不同的哺乳動物系統中進行的RNA干擾研究表明合成的siRNA是有功能的。...
RNAi的研究進展2016/1/12
RNA干擾(RNAinterference,RNAi)現象是一種進化上保守的抵御轉基因或外來病毒侵犯的防御機制。將與靶基因的轉錄產物mRNA存在同源互補序列的雙鏈RNA(doublestrandRNA...
分子克隆常用載體2016/1/7
DNA片段的克隆需要合適的載體,載體或是質粒,或是噬菌體,或是病毒,通常大多經過人工改造[地的。作為載體必須具備兩條件:一是該載體在細胞內必須能自主復制,即必須具備復制原點;二是該載體必須具備適合的酶...

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