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如何確定提取到的RNA質量2015/10/21
如何確定RNA質量的經驗談1)檢測RNA溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光度分別代表了核酸、背景(溶液渾濁度)、鹽濃度和蛋白等有機物的值。一般的,我們只看OD260/OD280(R...
質粒DNA的抽提與純化2015/10/15
原理:堿變性抽提質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH值高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,...
基因的PCR擴增(聚合酶鏈式反應)2015/10/12
實驗目的1.學習pcr反應的基本原理與實驗技術。2.了解引物設計的一般要求。實驗原理單鏈DNA在互補寡聚核苷酸片段的引導下,可以利用DNA聚合酶按5’→3’方向復制出互補DNA。這時單鏈DNA稱為模板...
SMART技術回顧2015/10/8
真核細胞的mRNA在加工過程中有一個比喻為“穿鞋戴帽”的過程,因此mRNA的3"末端都帶有一段PolyA,這是利用逆轉錄酶制備cdna文庫的基礎。但是由于cDNA的5"端的序列各不相同,如何獲得全長的...
擴增基礎上的已知點突變檢測進展2015/9/23
在眾多導致人類疾病的基因有義突變、病原體亞型以及耐藥基因的有義突變中,單堿基突變占了相當大的比例,其檢測方法的探索一直是基因診斷研究中的重要課題。本文著重介紹了幾種近年發展起來的新技術:反向限制性位點...
士鋒生物定量PCR技術2015/9/18
定量pcr(PolymeraseChainReaction)技術有廣義概念和狹義概念。廣義概念的定量PCR技術是指以外參或內參為標準,通過對PCR終產物的分析或PCR過程的監測,進行PCR起始模板量的...
如何進行DNA序列測定技術2015/9/9
序列測定的技術和策略Sanger雙脫氧鏈終止法Maxam-GilbertDNA化學降解法測序策略目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等(1977)提出的酶法及Maxam和Gilbert(197...
核酸抽提:mRNA的分離2015/9/6
與rRNA和tRNA不同的是,哺乳動物細胞的絕大部分mRNA在其3"端均有一poly(A)尾,因此可以用oligo(dT)-纖維素親和層析法從大量的細胞RNA中分離mRNAdmonds等,1971;A...
RNAi的功能介紹2015/9/1
1.高通量的研究基因功能在后基因組時代,需要大規模高通量的研究基因的功能,由于RNAi能特異的阻斷基因的表達,因而RNAi成為研究基因功能的很好的工具。研究者將線蟲三號染色體上2232個基因對應的ds...
RNAi及小分子RNA2015/8/31
摘要:RNA干涉(RNAinterference)在細胞分裂過程中發揮了至關重要的控制作用,對引導細胞形成某種特定類型的組織產生深遠的影響。《科學》把這一令人激動的發現當作2002年zui重大的科學突...
外源DNA和質粒載體的連接反應2015/8/27
外源DNA片段和線狀質粒載體的連接,也就是在雙鏈DNA5"磷酸和相鄰的3"羥基之間形成的新的共價鏈。如質粒載體的兩條鏈都帶5"磷酸,可生成4個新的磷酸二酯鏈。但如果質粒DNA已去磷酸化,則吸能形成2個...
士鋒Taq DNA聚合酶介紹2015/8/11
(一)酶活性與熱穩定性該酶基因全長2496個堿基,編碼832個氨基酸,酶蛋白分子為94KDa.其比活性為200000單位/mg.75~80℃時每個酶分子每秒鐘可延伸約150個核苷酸,70℃延伸率大于6...
士鋒PCR反應體系與反應條件2015/8/5
標準的pcr反應體系:10×擴增緩沖液10ul4種dNTP混合物各200umol/L引物各10~100pmol模板DNA0.1~2ugTaqdna聚合酶2.5uMg2+1.5mmol/L加雙或三蒸水至...
士鋒序列測定的技術和策略2015/7/27
測序策略目前應用的兩種快速序列測定技術是Sanger等(1977)提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化學降解法。雖然其原理大相徑庭,但這兩種方法都是同樣生成互相獨立的若干組帶放射...
如何進行NADPH-細胞色素C(P-450)活性測定2015/7/20
NADPH-細胞色素C(P-450)是一種血紅素蛋白,它是一個末端氧化酶,由于當它處于還原形式時,與一氧化碳結合形成一種亞鐵羰基加成物。在可見光450nm處有zui大的吸收峰,故命名為細胞色素P-45...

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