GSH過氧化物酶(GPX)測試盒谷胱系列_分光法
測定方法:_分光光度
產品規格:50管/48樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
GSH-Px是(GSH)氧化還原循環中催化還原型(GSH)氧化的主要酶之一。GSH-Px不僅能夠特異地催化還原型(GSH)與ROS反應,生成氧化型(GSH)GSSG,從而保護生物膜免受ROS的損害,維持細胞的正常功能;而且具有保護肝臟、提高機體免疫力、拮抗有害金屬離子對機體的傷害和增加機體抗輻射等能力。
GSH過氧化物酶(GPX)測試盒谷胱系列_分光法
測定原理:
GSH-Px催化有機過氧化物氧化GSH,產生GSSG;(GSH)還原酶(GR)催化NADPH還原GSSG,再生GSH,同時NADPH氧化生成NADP+;NADPH在340 nm有特征吸收峰,而NADP+沒有;通過測定340 nm光吸收減少速率來計算GSH-Px活性。
自備儀器和用品:
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配置:
試劑一:液體100mL×1瓶,室溫保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體20μL×1支,-20℃保存。
試劑四:液體200μL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1.組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
2.細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3.血清等液體:直接測定。
測定操作:
1. 分光光度計預熱30 min,調節波長到340 nm,蒸餾水調零。
2. 混合試劑在25℃或者37℃(哺乳動物)水浴中預熱30min。
3. 混合試劑配制:臨用前,在試劑二中加入試劑一40 mL,充分震蕩溶解后加入全部試劑三,混勻。(注意:必須現配現用,當天使用完)
4.試劑四的稀釋: 吸取21.5μL試劑四,加入5mL水充分混勻,臨用前配制,配制好的試劑當天使用。
5. 測定管:依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、800μL預熱的混合試劑、100μL稀釋后的試劑四, 迅速混勻后于340nm處測定第30 s和第210s的吸光值,分別記為A1和A2,△A= A1﹣A2。