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當(dāng)前位置:上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司>>生化測(cè)試盒>>谷胱系列>> 100管/96樣谷胱系列γ-谷氨酰連接酶(GCL)測(cè)試盒_微量法

谷胱系列γ-谷氨酰連接酶(GCL)測(cè)試盒_微量法

參  考  價(jià):面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)100管/96樣

品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所在地上海市

更新時(shí)間:2022-07-26 10:21:16瀏覽次數(shù):624次

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品牌 紀(jì)寧生物 貨期 現(xiàn)貨供應(yīng)
有效期 6個(gè)月 用途 僅供科研實(shí)驗(yàn)使用
谷胱系列γ-谷氨酰連接酶(GCL)測(cè)試盒_微量法由上海紀(jì)寧生物公司提供,包括GCL檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書,免費(fèi)代測(cè),規(guī)格,包裝,品牌等關(guān)于有關(guān)本司測(cè)試盒所有產(chǎn)品的詳細(xì)介紹

谷胱系列γ-谷氨酰連接酶(GCL)測(cè)試盒_微量法

測(cè)定方法:微量法

產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣

注    意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

GCL 是 GSH 合成的限速酶,GSH 對(duì) GCL 有反饋抑制作用。GCL基因表達(dá)受多種因素調(diào)節(jié),如氧化劑、抗氧化劑、生長(zhǎng)因子和炎癥因子等。GCL活性高低對(duì)GSH含量和GSH/GSSG比值有重要影響。

測(cè)定原理:

在ATP和Mg2+存在下,GCL催化Glu和Cys合成γ-谷氨酰Cys;同時(shí)ATP去磷酸化產(chǎn)生無(wú)機(jī)磷分子,通過(guò)測(cè)定無(wú)機(jī)磷增加速率,即可計(jì)算出GCL活性。

自備儀器和用品:

冷凍離心機(jī)、水浴鍋、移液器、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、濃硫酸和蒸餾水。


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試劑組成和配制:

試劑一:液體105mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加6 mL蒸餾水充分震蕩溶解。

試劑三:粉劑×1管,4℃保存。臨用前加入蒸餾水1.5 mL充分震蕩溶解。

試劑四:液體7mL×1瓶,室溫保存。

試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入12 mL蒸餾水,充分震蕩溶解后,緩緩加入400µL濃硫酸(自備),邊加邊攪拌。

谷胱系列γ-谷氨酰連接酶(GCL)測(cè)試盒_微量法

粗酶液提?。?/p>

1.組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2.細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

3.血清等液體:直接測(cè)定。

GCL測(cè)定操作:

1.分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到660nm,蒸餾水調(diào)零。

2.空白管:取1.5mLEp管,依次加入試劑一48µL、試劑二52µL、試劑三12µL和蒸餾水24µL,混勻后蓋緊,37℃水浴準(zhǔn)確反應(yīng)15 min;再加入試劑四60µL,混勻后,室溫(25℃左右)8000g,離心10 min,取上清100µL,加入試劑五100µL,混勻后蓋緊,45℃水浴10min,冷卻后測(cè)定660nm處光吸收,記為A空白管。

3.測(cè)定管:取1.5mLEp管,依次加入試劑一48µL、試劑二52µL、試劑三12µL和上清液24µL,混勻后蓋緊,37℃水浴準(zhǔn)確反應(yīng)15 min;再加入試劑四60µL,混勻后,室溫(25℃左右)8000g,離心10 min,

4.取上清100µL,加入試劑五100µL,混勻后蓋緊,45℃水浴10min,冷卻后測(cè)定660nm處光吸收,記為A測(cè)定管。

注意:空白管只需要測(cè)定一次。



γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶γ-GT測(cè)試盒谷胱系列_分光法

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