谷胱系列GSH過(guò)氧化物酶(GPX)測(cè)試盒_微量法
測(cè)定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
GSH-Px是(GSH)氧化還原循環(huán)中催化還原型(GSH)氧化的主要酶之一。GSH-Px不僅能夠特異地催化還原型(GSH)與ROS反應(yīng),生成氧化型(GSH)GSSG,從而保護(hù)生物膜免受ROS的損害,維持細(xì)胞的正常功能;而且具有保護(hù)肝臟、提高機(jī)體免疫力、拮抗有害金屬離子對(duì)機(jī)體的傷害和增加機(jī)體抗輻射等能力。
谷胱系列GSH過(guò)氧化物酶(GPX)測(cè)試盒_微量法
測(cè)定原理:
GSH-Px催化有機(jī)過(guò)氧化物氧化GSH,產(chǎn)生GSSG;(GSH)還原酶(GR)催化NADPH還原GSSG,再生GSH,同時(shí)NADPH氧化生成NADP+;NADPH在340 nm有特征吸收峰,而NADP+沒(méi)有;通過(guò)測(cè)定340 nm光吸收減少速率來(lái)計(jì)算GSH-Px活性。
自備儀器和用品:
低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、酶標(biāo)儀、96孔板、和蒸餾水。
試劑組成和配置:
試劑一:液體120mL×1瓶,室溫保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體10μL×1支,-20℃保存。
試劑四:液體200μL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測(cè)。
2.細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。
3.血清等液體:直接測(cè)定。
GSH-Px測(cè)定操作:
1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm。
2. 混合試劑在25℃或者37℃(哺乳動(dòng)物)水浴中預(yù)熱30min。
3. 混合試劑配制:臨用前,在試劑二中加入試劑一20 mL,充分震蕩溶解后加入全部試劑三,混勻。(當(dāng)天用完)
4. 試劑四的稀釋:吸取21.5μL試劑四,加入5mL蒸餾水充分混勻,臨用前配制,配制好的試劑當(dāng)天使用。
5. 測(cè)定管:依次在96孔板中加入20μL上清液、160μL預(yù)熱的混合試劑、20μL稀釋后的試劑四,迅速混勻后于340nm處測(cè)定第30 s和第210s的吸光值,分別記為A1和A2。△A測(cè)定管= A1﹣A2。