硫氧還蛋白過氧化物酶(TPX)測試盒_谷胱系列
測定方法:分光光度法
產品規格:50管/48樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
TPX屬于過氧化物酶家族,在體內主要通過還原過氧化氫和一些氫過氧化物來實現抗氧化作用,功能與GPX類似,也是(GSH)氧化還原循環關鍵酶之一。TPX普遍存在于各種生物體內,如酵母、植物、動物、原生動物、寄生蟲、細菌和古細菌,在進化上高度保守。TPX與細胞增殖、分化、細胞凋亡及腫瘤發生調控密切相關。TPX的主要功能包括細胞脫毒、抗氧化和調節由過氧化氫介導的信號轉導和免疫反應。
硫氧還蛋白過氧化物酶(TPX)測試盒_谷胱系列
測定原理:
TPX催化H2O2氧化二硫蘇糖醇(DTT),H2O2的吸收波長為240nm,通過測定240nm吸光度的下降速率,即可計算出TPX活性。
自備儀器和用品:
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水
試劑組成和配制:
試劑一:液體50mL×1瓶,室溫保存。
試劑二:液體50mL×1瓶,- 20℃保存。
試劑三:液體5mL×1瓶,4℃。
粗酶液提取:
1. 組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體:直接測定。
TPX測定操作:
1. 分光光度計預熱30min,調節波長到240 nm,蒸餾水調零。
2.試劑二置于25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動物)水浴預熱30 min。
3.取1mL石英比色皿,加入20 μ L上清液,900 μ L試劑二,80 μ L試劑三,迅速混勻后于240 nm測定10 s和130 s吸光度,記為A1和A2。