谷胱系列氧化型(GSSG)含量測試盒_微量法
測定方法:微量法
產品規格:100管/96樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
GSH/GSSG是細胞內重要的氧化還原對之一。因此,測定細胞內GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態,也是(GSSG)氧化還原循環的主要指標之一。
谷胱系列氧化型(GSSG)含量測試盒_微量法
測定原理:
利用2-VP法測GSSG含量。
自備儀器和用品:
低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。
試劑組成和配置:
試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體600μL×1支,4℃保存。
試劑三:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑四:液體2.5mL×1瓶,4℃保存。
試劑五: 液體15μL×1瓶,-20℃保存。臨用前加入0.3mL試劑三稀釋,4℃保存。
試劑六:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入20 mL試劑三溶解,現配現用。
粗酶液提取:
1. 組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清液(如上清不清澈,再離心3min)待測。
2. 細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);8000g 4℃離心10min,取上清液(如上清不清澈,再離心3min)混勻待測。
3. 血清等液體:直接測定。
GSSG含量測定:
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長到412nm,蒸餾水調零。
2. 試劑三置于25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動物)水浴中保溫30min。
3.取1 mL EP管,加入100μ L上清液,5 μ L試劑二,蓋緊后混勻,得混合液,置于37℃水浴30min;取21μ L混合液于96孔板,然后依次加入20 μ L試劑四、2 μ L試劑五和140 μ L試劑六,迅速混勻后,測定30 s和150 s光吸收A1和A2,計算ΔA=A2-A1。