谷胱系列硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)測試盒
測定方法:微量法
產品規格:100管/96樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
TrxR是一種NADPH依賴的包含FAD結構域的二聚體硒酶,屬于吡啶核苷酸-二硫化物氧化還原酶家族成員,與硫氧還蛋白以及NADPH共同構成了硫氧還蛋白系統。TrxR與GR活性類似,催化GSSG還原生成GSH,是(GSH)氧化還原循環關鍵酶之一。
谷胱系列硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)測試盒
測定原理:
TrxR催化NADPH還原DTNB生成TNB和NADP+,TNB在412 nm有特征吸收峰,通過測定412nm波長處TNB的增加速率,即可計算TrxR活性。
自備儀器和用品:
低溫離心機、可調節移液器、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體120mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體2mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:粉劑×1管,4℃保存。臨用前加入2mL蒸餾水溶解。
粗酶液提取:
1.組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
2.細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體:直接測定。
TrxR測定操作:
1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min,調節波長到412nm,用蒸餾水調零。
2. 試劑一在25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動物)預熱30min。
3. 空白管:取微量玻璃比色皿或96孔板,加入20μL試劑二,20μL試劑三,160μL試劑一,迅速混勻后于412 nm測定10 s和310 s吸光度,記為A1和A2。△A空白管=A2-A1。
4. 測定管:取微量玻璃比色皿或96孔板,加入20μL試劑二,20μL試劑三,140μL試劑一,20μL上清液,迅速混勻后于412 nm測定10 s和310 s吸光度,記為A3和A4。△A測定管=A4-A3。
注意:空白管只需測定一次。