谷胱系列還原型(GSH)測試盒_分光光度法
測定方法:分光光度法
產品規格:50管/48樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
GSH是細胞內主要的抗氧化巰基物質,在抗氧化、蛋白質巰基保護和氨基酸跨膜運輸等中具有重要作用。還原型與氧化型比值(GSH/GSSG)是細胞氧化還原狀態的主要動態指標。因此,測定細胞內GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態。
測定原理:
DTNB與GSH反應生成復合物,在412nm處有特征吸收峰;其吸光度與GSH含量成正比。
自備儀器和用品:
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。
谷胱系列還原型(GSH)測試盒_分光光度法
粗酶液提取:
1.組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
2.細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3.血清等液體:直接測定。
GSH測定操作:
1. 分光光度計預熱30min,調節波長到412 nm,蒸餾水調零。
2. 試劑二置于25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動物)水浴中保溫30min。
3. 空白管:取1mL玻璃比色皿,依次加入100μL蒸餾水,700μL試劑二,200μL試劑三,混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A1。
4. 測定管:取1mL玻璃比色皿,依次加入100μL上清液,700μL試劑二,200μL試劑三,混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A2。
注意:空白管只需要測定一次。