谷胱系列還原型(GSH)測試盒_微量法
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
GSH是細胞內(nèi)主要的抗氧化巰基物質(zhì),在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護和氨基酸跨膜運輸?shù)戎芯哂兄匾饔?。還原型與氧化型比值(GSH/GSSG)是細胞氧化還原狀態(tài)的主要動態(tài)指標(biāo)。因此,測定細胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態(tài)。
測定原理:
DTNB與GSH反應(yīng)生成復(fù)合物,在412nm處有特征吸收峰;其吸光度與GSH含量成正比。
自備儀器和用品:
低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。
谷胱系列還原型(GSH)測試盒_微量法
粗酶液提?。?/p>
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體:直接測定。
GSH測定操作:
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到412 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動物)水浴中保溫30min。
3. 空白管:取微量玻璃比色皿或96孔板,依次加入20μL蒸餾水,140μL試劑二,40μL試劑三,混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A1。
4. 測定管:取微量玻璃比色皿或96孔板,依次加入20μL上清液,140μL試劑二,40μL試劑三,混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A2。
注意:空白管只需要測定一次。