羥脯-氨酸(HYP)測試盒_氨基酸代謝系列
測定方法:分光光度法
產品規格:50管/48樣
注 意 : 正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
HYP是機體膠原蛋白主要成分之一,膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等,因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標。
羥脯-氨酸(HYP)測試盒_氨基酸代謝系列
測定原理:
樣品經酸水解產生游離的HYP,進一步被氯胺T氧化,氧化產物與對二甲氨基苯-甲醛反應,產生紅色化合物,在560nm處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液560nm吸光值,可計算HYP含量。
自備實驗用品及儀器:
天平、烘箱、玻璃管、離心機、水浴鍋、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、無水乙醇、異丙醇、6mol/L鹽酸和蒸餾水。
試劑組成和配制:
組織提取液:6mol/L鹽酸,自備。濃鹽酸:H2O(V/V)= 1:1,室溫保存。
細胞提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。
羥脯-氨酸提取:
1.組織:稱取約0.5g樣品于玻璃管,加入5mL的組織提取液,置于110℃烘箱,水解6至12小時,用提取液定容至5mL,12000g,25℃,離心20min,取上清待測。
2.細胞:取500萬個細胞,加入2mL的細胞提取液,于高壓消毒器中15磅保持30min,自然降壓后待測。
3.血清游離羥脯-氨酸提取:取0.2mL血清,加入1mL無水乙醇使蛋白質沉淀,8000g4℃離心5min。將上清倒入另一個EP管,氮吹或沸水浴將乙醇揮發干。冷卻后再加入0.4mL50%異丙醇,充分溶解混勻待測。