一、試劑
1 、 10 × TBE （ pH 8.3 ）：
2 、 46% 尿素溶液：
3 、 20% 聚丙烯酰胺溶液
4 、 10% 過硫酸胺
5 、引物
6 、模板
7 、 DNA 聚合酶
8 、放射性標記的 dNTP 和 ddNTP 貯存液
9、TEMED
二、操作方法
（一）由雙鏈質粒制備單鏈DNA膜板
取質粒 DNA （溶于雙離蒸去離子水中） 8μl （ 1.5 ～ 2ug ）
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加 2mol NaOH 2ul ，混勻后稍加離心，置室溫 10min
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加 3mol 乙酸鈉（ pH5.2 ） 3μl
雙蒸去離子水 7μl
無水乙醇 60μl
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置液氮 10min ，離心 10min （ 13krpm ），
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加 70%乙醇洗1次，離心 （ 13krpm ）
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棄上清，真空抽干，溶于 10ul雙 蒸去離子水中
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取樣，電泳鑒定
（二）聚丙烯酰胺/尿素膠制備：
將玻板洗凈，拭干； 70% 乙醇洗，涼干；內層涂硅油，
重蒸水洗凈，吹干
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混合： 20% 聚丙烯酰胺液 20ml
10 × TBE 5ml
46%尿素 25ml
總計40ml過濾紙濾過
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加 10%過硫酸胺（AP）250μl；用雙蒸去離子水定容至100ml，混勻
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倒膠前加入 TEMED 50μl，混勻
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灌膠，待凝膠聚合后，將測序膠板安裝于測序電泳槽中
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電泳槽中加入 800ml1 × TBE
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預電泳
