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Ex (nm)	491	Em (nm)	516
溶劑	DMSO	儲存條件	在零下15度以下保存, 避免光照

Amplite 熒光法通用型蛋白酶活性檢測試劑盒 蛋白酶測定法廣泛用于蛋白酶抑制劑的研究和蛋白酶活性的檢測。監(jiān)測各種蛋白酶活性已成為許多生物實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)任務(wù)。一些蛋白酶已被確定為良好的藥物開發(fā)目標(biāo)。

我們的Amplite 通用熒光蛋白酶活性檢測試劑盒是進(jìn)行常規(guī)檢測分離蛋白酶或鑒定蛋白質(zhì)樣品中污染蛋白酶的理想選擇。該試劑盒使用熒光酪蛋白偶聯(lián)物，其被證明是廣譜蛋白酶（例如*，*，嗜熱菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和彈性蛋白酶）的通用底物。在完整的底物中，酪蛋白用綠色熒光染料嚴(yán)重標(biāo)記，導(dǎo)致顯著的熒光猝滅。蛋白酶催化的水解減輕了其猝滅效應(yīng)，產(chǎn)生明亮的熒光染料標(biāo)記的短肽。熒光強(qiáng)度的增加與蛋白酶活性成正比。該測定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，并且易于適應(yīng)自動化。使用FITC濾光片組，可以使用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 490/525 nm下輕松讀取其信號。百螢生物為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 熒光法通用型蛋白酶活性檢測試劑盒。

實(shí)驗(yàn)方案

一個96孔板的測定方案

以下說明書僅提供指南，實(shí)際應(yīng)根據(jù)您的具體需求進(jìn)行修改。

概述（方案A）

檢測樣品中的蛋白酶活性

準(zhǔn)備蛋白酶底物溶液 (50 µL)

添加底物對照、陽性對照或測試樣品 (50 µL)

跳過孵育以進(jìn)行動力學(xué)讀數(shù)或孵育 30 至 60 分鐘以進(jìn)行終點(diǎn)讀數(shù)

在 Ex/Em = 490/525 nm 處檢測熒光強(qiáng)度

概述（方案B）

使用純化酶篩選蛋白酶抑制劑

準(zhǔn)備蛋白酶底物溶液 (10 µL)

添加底物對照、陽性對照、載體對照或測試樣品 (90 µL)

跳過孵育以進(jìn)行動力學(xué)讀數(shù)或孵育 30 至 60 分鐘以進(jìn)行終點(diǎn)讀數(shù)

在 Ex/Em = 490/525 nm 處檢測熒光強(qiáng)度

工作溶液配制

1. 蛋白酶底物溶液（用于方案 A）

在 2X 檢測緩沖液（組分 C）中以 1:100 的比例稀釋蛋白酶底物（組分 A）。在 96 孔板中，每次測定使用 50 μL 的蛋白酶底物溶液。
注意：2X 檢測緩沖液（組分 C）設(shè)計(jì)用于檢測糜*白酶、胰*白酶、嗜熱菌蛋白酶、蛋白酶 K、蛋白酶 XIV 和人類白細(xì)胞彈性蛋白酶的活性。對于其他蛋白酶，請參閱下表 1 以了解適當(dāng)?shù)臏y定緩沖液配方。

2. 胰蛋*酶稀釋（用于方案 A）

在去離子水中以 1:50 的比例稀釋胰*白酶（5 U/µL，組分 B），以獲得 0.1 U/µL 的濃度。

3. 檢測緩沖液 (1X)（用于方案 B）

將 5 mL 去離子水加入 5 mL 的 2X 檢測緩沖液（組分 C）中。

4. 蛋白酶底物溶液（用于方案 B）

在 1X 檢測緩沖液中以 1:20 稀釋蛋白酶底物（組分 A）。對 96 孔板使用 10 μL/孔的蛋白酶底物溶液。
注意：2X 測定緩沖液（組分 C）設(shè)計(jì)用于檢測糜*白酶、胰*白酶、嗜熱菌蛋白酶、蛋白酶 K、蛋白酶 XIV 和人類白細(xì)胞彈性蛋白酶的活性。對于其他蛋白酶，請參閱下表 1 以了解適當(dāng)?shù)臏y定緩沖液配方。

5. 蛋白酶稀釋（用于方案 B）

將 1X 檢測緩沖液中的蛋白酶稀釋至 500-1000 nM 的濃度（對于胰*白酶 50-100 U/mL）。每孔需要 10 μL 的蛋白酶稀釋液。為所有測試樣品準(zhǔn)備適當(dāng)?shù)牧浚瑸殛栃詫φ蘸洼d體對照孔準(zhǔn)備額外的量。