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南極熱敏UDG

參  考  價:936 - 3900
具體成交價以合同協議為準
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    其他品牌

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    生產商

  • 所在地

    上海市

規格

100U 936元 15盒可售

500U 3900元 15盒可售

更新時間:2024-05-22 10:47:20瀏覽次數:170次

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貨號 XG-P3064 規格 100U、500U
包裝 盒裝 用途 僅供科研研究實驗
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南極熱敏UDG

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貨號

規格

分類

XG-P3064

100U

核酸酶系列

XG-P3064

500U

核酸酶系列

是來源于嗜冷海洋細菌經大腸桿菌表達純化的的重組蛋白。
該酶能有效地水解單鏈或雙鏈DNA 上的niao嘧啶,產生的缺嘧啶位點,在高溫或高 pH下,極易水解斷裂。該酶對 RNA 無活性,主要用于 PCR擴增產物的防污染。大腸桿菌來源的niao嘧啶-DNA 糖基化酶較為耐熱,經 95℃10min 處理仍會殘留有少量的niao嘧啶-DNA 糖基化酶活性,導致含有 dU 堿基的 PCR 產物的降解。
而來源于嗜冷海洋細菌的熱敏型 UDG 在 50℃5min 即失活,在進行 PCR 擴增前,在 PCR 混合液中添加niao嘧啶-DNA 糖基化酶(熱敏性),25℃ 2min 即可消除以往 PCR 產物的殘留污染,由于niao嘧啶-DNA 糖基化酶(熱敏性)在 PCR 循環的 94℃變性一步便可被滅活,因此不會影響新的含 dU 的 PCR 產物。

活性定義:在標準反應體系下,37°C 每分鐘催化 60 pmol niao嘧啶從含niao嘧啶的雙鏈 DNA 上釋放所需要的酶量為一個活性單位。
反應 Buffer:
ThermoLabile Uracil DNA Glycosylase (UDG)與絕大多數的 PCR 聚合酶反應緩沖液都是兼容的,但在高離子濃度(>100 mM)下活性會受到抑制。在防污染 PCR 中的使用濃度推薦為 10 mU-50 mU/μ(l 25℃下作用 2min 即可),在不同的緩沖系統下可能會有差別。
酶儲存液:20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, ,50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。
儲存:置于-20°C 可保存 2 年。
熱失活:50°C,5min。

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一、模板DNA:PCR反應需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;

二、引物:PCR反應的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;

三、dNTPs:PCR反應中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成         等生物學過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;

四、Taq DNA聚合酶:PCR反應需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;

五、PCR buffer溶液:對PCR反應具有緩沖作用,調節反應pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應特異性,從而提高反應效率;

六、酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應產物;


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①Oligo dT
選擇Oligo dT時,要求RNA必須有Poly A,所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT,對RNA樣品的質量要求較高,不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應,建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT,尤其適合模板豐度很低的情況(比如某個gene表達量很低)。選擇隨機引物時,第鏈cDNA合成反應中就是以所有的RNA為模板,然后進行PCR反應時設計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關系,一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng,如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng,可能會導致小片段產物(<500bp)的增加和長片段、全長產物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物(GSP)是某個基因序列的一部分,與模板互補的引物。該引物需要結合目標RNA的已知序列進行設計。由于引物和RNA序列特異性結合,每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此,當分析多種目標時,則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同,所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物,建議對退火溫度進行優化。

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