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T7 Endonuclease I

參  考  價:624 - 3900
具體成交價以合同協議為準
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    上海市

規格

250U 624元 15盒可售

2500U 3900元 15盒可售

更新時間:2024-05-22 10:43:09瀏覽次數:153次

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貨號 XG-P3072 規格 250U、2500U
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T7 Endonuclease I

T7 Endonuclease I

貨號

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分類

XG-P3072

250U

核酸酶系列

XG-P3072

2500U

核酸酶系列

T7 核酸內切酶 I 識別并切割不配對 DNA、十字型結構 DNA、Holliday 結構或交叉 DNA、異源雙鏈 DNA 或者以更慢的速度切割含切刻的雙鏈 DNA。該酶切割錯配堿基 5′ 端的、第二或第三個磷酸二酯。
本產品是通過克隆重組表達 T7 核酸內切酶 I 基因,獲得的高純度蛋白,該酶無其他內切酶或外切酶污染。
活性定義:在 50 μl 反應體系,37℃ 條件下,1 小時將90% 以上的 1 μg 超螺旋十字型結構的 pUC(AT)* 轉化成 90% 以上的線性結構所需要的酶量定義為一個活性單位。
應用:
基因突變、SNP、TALEN 或 CRISPR/Cas9 形成的突變體檢測識別錯配 DNA分解四方向交叉 DNA 或分支 DNA檢測或切割異源二聚體 DNA 和切刻 DNA隨機切割線性 DNA 進行 shot-gun 克隆1X T7 Endonuclease I Buffer:
50 mM NaCl,10 mM Tris-HCl,10 mM MgCl2 ,1 mMDTT(pH 7.9 @ 25℃)
酶儲存液:50 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% Glycerol, pH 7.5。
儲存:置于-20°C 可保存 2 年,避免反復凍融。
注意事項
(1) T7 核酸內切酶 I 是一種具有底物結構選擇性的酶;該酶以不同的活性作用于不同的 DNA 底物。切割特定底物,必須控制酶量和反應時間。
(2)反應溫度超過 42℃時,會增加非特異性核酸酶活性。


T7 Endonuclease I


T7 Endonuclease I

一、模板DNA:PCR反應需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;

二、引物:PCR反應的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;

三、dNTPs:PCR反應中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成         等生物學過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;

四、Taq DNA聚合酶:PCR反應需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;

五、PCR buffer溶液:對PCR反應具有緩沖作用,調節反應pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應特異性,從而提高反應效率;

六、酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應產物;


T7 Endonuclease I


T7 Endonuclease I

①Oligo dT
選擇Oligo dT時,要求RNA必須有Poly A,所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT,對RNA樣品的質量要求較高,不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應,建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT,尤其適合模板豐度很低的情況(比如某個gene表達量很低)。選擇隨機引物時,鏈cDNA合成反應中就是以所有的RNA為模板,然后進行PCR反應時設計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關系,一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng,如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng,可能會導致小片段產物(<500bp)的增加和長片段、全長產物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物(GSP)是某個基因序列的一部分,與模板互補的引物。該引物需要結合目標RNA的已知序列進行設計。由于引物和RNA序列特異性結合,每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此,當分析多種目標時,則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同,所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物,建議對退火溫度進行優化。

T7 Endonuclease I

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