分子量 | 激發(nm) | 發射(nm) | |
292633-16-0 | 711.72 | 341 | 441 |
Caspase 9是半guangansuan蛋白酶caspase家族CED-3亞家族的成員,在凋亡的執行階段起著至關重要的作用。這些酶對于天冬氨酸殘基后的切割鍵具有主要的一級特異性。“啟動子"胱天蛋白酶(例如胱天蛋白酶8)激活“效應子"胱天蛋白酶,例如胱天蛋白酶3和7。效應子胱天蛋白酶然后裂解細胞底物,zui終導致凋亡的形態學改變。Ac-LEHD-AMC是caspase 9的選擇性熒光底物。caspase9誘導的Ac-LEHD-AMC水解導致AMC熒光團的釋放,可通過?365 nm的激發波長和??的發射波長檢測到450 nm。可以在由50 mM MES,pH 6.5、10%PEG 8000、0.1%CHAPS,5 mM DTT,
重要的是要存放在<-15°C的環境中,并應存放在陰涼處。
自收到之日起12個月內可以使用。
程序
以下協議僅提供指導,應根據您的特定需求進行修改。
使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的常規解決方案胱天蛋白酶測定
在DMSO中準備10 mM的儲備溶液。
如下準備2X半胱天冬酶底物(50 µM)分析溶液:50 µL底物原液,100 µL DTT(1M),400 µL EDTA(100 mM),10 mL Tris Buffer(20 mM),pH = 7.4。
將等體積的半胱天冬酶標準品或樣品與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合,并在室溫下孵育至少1小時。
使用熒光酶標儀讀取熒光,或使用酶標儀讀取吸光度。
使用細胞滲透性FMK Caspase探針的細胞Caspase測定
在DMSO中準備2-5 mM的儲備溶液。
根據需要處理細胞。
通過用20 mM Hepes緩沖液(HHBS)在Hanks中稀釋DMSO儲備溶液(來自步驟2.1),制備2X滲透性半胱天冬酶底物(20 µM)分析溶液。
將等體積的處理過的細胞與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合(來自步驟2.3),并在37°C,5%CO 2的 培養箱中孵育細胞至少1小時。
用HHBS清洗細胞至少一次。
通過流式細胞儀,熒光顯微鏡或熒光酶標儀監測熒光強度。
使用細胞滲透性FMK Caspase探針進行細胞半胱天冬酶測定 (僅適用于#13470-13476)
通過向小瓶中加入50 µL DMSO制備250X儲備液。
根據需要處理細胞。
以1:250的比例將250 X DMSO儲備溶液添加到細胞溶液中(例如2 µL至500 µL細胞),并將細胞在37°C,5%CO2的培養箱中孵育1小時。
用HHBS清洗細胞至少一次。
通過流式細胞儀,熒光顯微鏡或熒光酶標儀監測熒光強度。
13427 Caspase 9熒光底物(Ac-LEHD)2-R110 綠 (Ac-LEHD)2-R110 1 mg 13430 Caspase 3/7熒光底物(Z-DEVD)2-R110 綠 (Z-DEVD)2-R110 1 mg