由于高度純化的若丹明110(R110)衍生的底物被鎖定為內酯構型,因此它們是無色且無熒光的。半胱天冬酶對R110肽的切割產生強熒光的R110,可以在510-530 nm處用488 nm的激發進行熒光檢測,這是熒光儀器中zui常用的激發光源。R110衍生的caspase底物可能是zui敏感的指示劑,廣泛用于熒光檢測各種caspase活性。該R110底物專門針對半胱天冬酶3和7。我們基于R110的底物經過高度純化,以消除痕量的游離R110,這是HPLC無法檢測到的,但會導致顯著的測定背景。
重要說明重要的
是要存放在<-15°C下,并且應該存放在陰涼處。
自收到之日起12個月內可以使用。
儲備溶液的制備
除非另有說明,否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣,并在制備后儲存在-20°C下。避免重復凍融循環。
1.(Z-DEVD)2 -R110儲備溶液(10 mM):
將65 µL DMSO加入1 mg(Z-DEVD)2 -R110的小瓶中制成10 mM儲備溶液。
準備工作溶液
半胱天冬酶3/7分析溶液(2X):
混合50 µL(Z-DEVD)2 -R110儲備液(10 mM),100 µL DTT(1M),400 µL EDTA(100 mM)和10 mL Tris Buffer(20 mM) ),pH = 7.4。
程序
- 將等體積的caspase 3/7標準品或樣品與2X caspase 3/7分析反應溶液混合,并在室溫下孵育至少1小時。
- 在Ex / Em = 490/525 nm處監測熒光的增加。
13431 Caspase 8熒光底物(Ac-IETD)2-R110 綠 (Ac-IETD)2-R110 1 mg 13433 Caspase 3/7熒光底物 Z-DEVD-ProRed™ 620 紅 Z-DEVD-ProRed™ 620 1 mg