Z-IETD-AFC是包含乙酰基（Ac）部分的熒光半胱天冬酶8 /粒酶B底物。該底物被胱天蛋白酶8水解以產生高熒光的7-酰胺基-4-三氟甲基香dou素（AFC）。

重要的是要存放在<-15°C的環境中，并應存放在陰涼處。

自收到之日起12個月內可以使用。 

程序

以下協議僅提供指導，應根據您的特定需求進行修改。

使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的常規解決方案胱天蛋白酶測定

1. 在DMSO中準備10 mM的儲備溶液。
    
2. 如下準備2X半胱天冬酶底物（50 µM）分析溶液：50 µL底物原液，100 µL DTT（1M），400 µL EDTA（100 mM），10 mL Tris Buffer（20 mM），pH = 7.4。
    
3. 將等體積的半胱天冬酶標準品或樣品與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合，并在室溫下孵育至少1小時。
    
4. 使用熒光酶標儀讀取熒光，或使用酶標儀讀取吸光度。

使用細胞滲透性FMK Caspase探針的細胞Caspase測定

1. 在DMSO中準備2-5 mM的儲備溶液。
    
2. 根據需要處理細胞。
    
3. 通過用20 mM Hepes緩沖液（HHBS）在Hanks中稀釋DMSO儲備溶液（來自步驟2.1），制備2X滲透性半胱天冬酶底物（20 µM）分析溶液。
    
4. 將等體積的處理過的細胞與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合（來自步驟2.3），并在37°C，5％CO _2的  培養箱中孵育細胞至少1小時。
    
5. 用HHBS清洗細胞至少一次。
    
6. 通過流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀監測熒光強度。

使用細胞滲透性FMK Caspase探針進行細胞半胱天冬酶測定 （僅適用于＃13470-13476）

1. 通過向小瓶中加入50 µL DMSO制備250X儲備液。
    
2. 根據需要處理細胞。
    
3. 以1：250的比例將250 X DMSO儲備溶液添加到細胞溶液中（例如2 µL至500 µL細胞），并將細胞在37°C，5％CO2的培養箱中孵育1小時。
    
4. 用HHBS清洗細胞至少一次。
    
5. 通過流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀監測熒光強度。

   13426	Caspase 9熒光底物Ac-LEHD-AMC 藍	Ac-LEHD-AMC	5 mg
   13427	Caspase 9熒光底物(Ac-LEHD)2-R110 綠	(Ac-LEHD)2-R110	1 mg