CTC流式細胞術活細菌檢測試劑盒提供了一種簡便的方法，可根據呼吸活動評估細菌的健康和活力。CTC本身是非熒光的，一旦被活細菌細胞表面的電子轉移系統(tǒng)還原，就會形成紅色和不溶性熒光CTC甲maz，可以用流式細胞儀檢測到。不能呼吸的死細菌或以較低頻率呼吸的不健康細菌將不產生或帶有CTC染色的紅色熒光很少，因此可對細菌種群的健康狀況進行半定量測量。

組件

1. 準備10倍染料儲備液
2. 準備細菌樣本
3. 將細菌樣品與CTC在37°C孵育30分鐘
4. PE-Texas Red通道通過流式細胞儀分析樣品

重要
在開始實驗之前，在室溫下解凍每種試劑盒成分之一。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復凍融循環(huán)。

1. CTC儲備溶液（10倍）：
將1 mL蒸餾水加到CTC瓶（組分A）中，制成10倍儲備溶液。注意：原液在-20°C穩(wěn)定2周。避光。

程序

1. 制備濃度為10 ⁶細胞/ ml的細菌樣品。在適當?shù)呐囵B(yǎng)基中使細菌生長到對數(shù)后期。通過以10,000 xg離心10分鐘除去培養(yǎng)基，然后將沉淀重懸于適量的PBS中。 注意： 在波長= 600 nm（OD600）處測量細菌培養(yǎng)物的光密度，以確定細胞數(shù)。對于大腸桿菌培養(yǎng)，OD600 = 1.0等于8 x 10 ⁸細胞/ ml。
    
2. 根據需要用測試化合物處理細胞。通過以10,000 xg離心10分鐘來去除處理物，然后將沉淀物重新懸浮在適量的測定緩沖液（組分B）中，使處理后樣品中的細菌濃度與活菌濃度相同。 注意：開始治療之前，請確定細菌培養(yǎng)物的濃度。 注意： 死細菌可以作為陰性對照。建議用70％乙醇殺死細菌30分鐘，然后煮沸60分鐘。
    
3. 將10 µL的10X CTC儲備溶液加到90 µL的細菌樣品中。
    
4. 充分混合，然后在黑暗中于37°C孵育30分鐘。
    
5. 在使用流式細胞儀分析細胞之前，添加400 µL分析緩沖液（組分B）以增加體積。
    
6. 用流式細胞儀通過PE-Taxes Red通道（Ex / Em = 488/615 nm）監(jiān)測細菌的熒光。 注意：要排除雜物，建議將流式細胞儀的閾值設置為以下值：FSC> 10,000，SSC> 5,000。 注意： CTC的效率高度依賴菌株，因此會相應優(yōu)化染色條件。

圖片

圖1.在37°C下，用1X CTC對活的和死的（經乙醇處理和煮沸的）大腸桿菌染色30分鐘。通過具有488nm激發(fā)和615 / 24nm帶通濾光片的流式細胞儀分析樣品。活細菌和死細菌種群顯示非常不同的峰值。