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MycoLight™快速熒光細菌革蘭氏染色試劑盒為測定活細菌中的革蘭氏征兆提供了一種簡便的方法。革蘭氏染色是臨床和研究環境中常用的將細菌種類分類為兩個大類的方法。不幸的是，傳統的革蘭氏染色法是乏味的并且涉及細菌固定，如果要進一步表征細菌，則這可能是一個顯著的缺點。MycoLight™快速熒光細菌革蘭氏染色試劑盒為活細菌提供了一步法革蘭氏染色測定法，克服了傳統革蘭氏染色測定法固有的問題。MycoLight™快速熒光細菌革蘭氏染色試劑盒利用兩種DNA染料MycoLight™Green和MycoLight™Red具有區分革蘭氏陽性和陰性細菌的能力。MycoLight™Green對革蘭氏陽性細菌和陰性細菌均染色，而MycoLight™Red則優先標記革蘭氏陽性細菌。這兩種染料的激發/發射zui大值對于MycoLight™綠色約為484/504 nm，對于MycoLight™紅色約為518/600 nm。因此，當革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌的混合物被染料染色時，革蘭氏陽性細菌將發出紅色熒光，而革蘭氏陰性細菌將發出綠色熒光。革蘭氏陽性和陰性染色可以分別用TRITC和FITC過濾器熒光監測。當革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌的混合物被染料染色時，革蘭氏陽性細菌將發出紅色熒光，而革蘭氏陰性細菌將發出綠色熒光。革蘭氏陽性和陰性染色可以分別用TRITC和FITC過濾器熒光監測。當革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌的混合物被染料染色時，革蘭氏陽性細菌將發出紅色熒光，而革蘭氏陰性細菌將發出綠色熒光。革蘭氏陽性和陰性染色可以分別用TRITC和FITC過濾器熒光監測。
平臺
| 熒光顯微鏡 | |
| 激發 | 488/540納米 |
| 發射 | 530/620納米 |
| 推薦板 | 黑墻/透明底 |
| 儀器規格 | FITC / TRITC過濾器 |
組件
| 組件A：MycoLight™綠色 | 1小瓶（100 µL） |
| 組分B：MycoLight™紅色 | 1小瓶（100 µL） |
協議范例
乍看上去
協議摘要
- 準備細菌樣本
- 準備并將MycoLight™染料工作溶液添加到細菌樣品中
- 在室溫下與MycoLight™染料工作溶液在黑暗中孵育15分鐘
- 使用FITC和TRITC濾光片組通過熒光顯微鏡或熒光光譜分析樣品
重要說明
使用前，請在室溫下解凍所有套件組件。
準備工作溶液
MycoLight™染料工作溶液：
在試管中混合等體積的MycoLight™綠色（組分A）和MycoLight™紅色（組分B），并充分混合。
程序
細菌樣品的制備
- 準備濃度約為10 7個細胞/ ml的細菌樣品。在適當的培養基中使細菌生長到對數后期。 注意：在波長= 600 nm（OD600）處測量細菌培養物的光密度，以確定細胞數。對于大腸桿菌培養，OD600 = 1.0等于8 x 10 8細胞/ ml。
- 通過以10,000 xg離心10分鐘除去培養基，然后將沉淀重懸于ddH 2 O中，將細菌濃度調節至?10 7細胞/ ml。
染色方案
- 向100 µL細菌懸液中加入2 µL MycoLight™染料工作溶液。
- 充分混合并在室溫下于黑暗中孵育15分鐘。
- 用熒光顯微鏡通過FITC（Ex / Em = 488/530 nm）通道監測革蘭氏陰性細菌的細菌熒光，并通過TRITC（Ex / Em = 540/620 nm）通道監測革蘭氏陽性細菌的細菌熒光。 注意：該協議僅提供指導，應根據不同的細菌菌株或其他特定需求進行優化。 注意：該試劑盒中的革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的相對比例也可以通過熒光光譜法估算。圖中包含樣本分析。
光譜
打開：高級頻譜查看器
2003004005006007008009000102030405060708090100Wavelength (nm)Normalized Intensity (%)
光標位置
| 波長（nm） | 0 |
| 相對強度（％） | 0 |
圖片
 圖1.用MycoLight™快速熒光細菌革蘭氏染色試劑盒對大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的混合物進行染色。紅色和橙色：革蘭氏陽性枯草芽孢桿菌細胞；綠色：革蘭氏陰性大腸桿菌細胞。
|  圖2. 制備了各種比例的 大腸桿菌 和 芽孢桿菌。1 mL細菌懸液用4μL染料工作溶液染色。用Cary Eclipse熒光分光光度計（A）測量熒光發射光譜（激發470 nm，發射480-700 nm），獲得綠色（490-510 nm）和紅色（590-610）的積分強度，綠色計算每種細菌懸浮液的λ/紅色比。 繪制了革蘭 |
