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小鼠可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)試劑盒

時間:2017/3/21閱讀:241
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小鼠可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)試劑盒ELISA中有三個必要的試劑:免疫吸附劑、結合物和酶的底物等。
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:
1、已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
2、酶標記的抗原或抗體(結合物);
3、酶的底物;
4、陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標準品和控制血清(定量測定中);
5、結合物及標本的稀釋液;
6、洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;
酶反應終止液,常用的HRP反應終止液為硫酸,其濃度按加量及比色液的zui終體積而異,在板式ELISA中一般采用2mol/L。

小鼠可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)試劑盒血清樣本采集和檢測注意事項:
  1、血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。
  2、 血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會產生假陽性反應。如在冰箱中保存過久,其中的可發生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。
  3、一般說來,在5天內測定的血清標本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存。凍結血清融解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作,也可加入適當防腐劑。

標本的保存:在5天內測定的標本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫凍存。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在-20 ℃或 -70 ℃條件下保存。避免反復凍融。標本2 -8 ℃ 可保存48小時,-20 ℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分標本也可加入適當防腐劑,激素類標本需添加抑肽酶。 

小鼠可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)試劑盒ELISA結果判定常用的幾種方法                                  
1) 目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2) 以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3) 以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。

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