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小鼠E鈣粘著蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒

時間:2017/3/21閱讀:191
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小鼠E鈣粘著蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒深圳子科生物自主研發酶聯免疫分析檢測試劑盒,品牌為ZIKER,可以檢測Human,Rat、Mouse、Porcine、Sheep、Monkey、Goat、Bovine、Canine、Rabbit、Chicken、Duck、Fish、Plant  等各種樣本,品種齊全,質量保證,免費代測、技術全程支持服務,我公司長期跟各大高校科研實驗室保持課題合作,經驗豐富,質量穩定!我們所有的產品都是我司直接供貨,無中間差價,直接供貨,讓您以*惠的實驗預算完成您的實驗!

試劑的準備:
1. 標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
500pg/ml(6號標準品)  原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
250pg/ml(5號標準品)  100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
125pg/ml(4號標準品)  100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
62.5pg/ml(3號標準品)  100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
31.2pg/ml(2號標準品)  100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
15.6pg/ml(1號標準品)  100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0pg/ml   (空白對照)   原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
 
小鼠E鈣粘著蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒試劑盒性能: 
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。
 
操作步驟:
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
 
結果判斷與分析:
1、 儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、 以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的LTB4標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的LTB4含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度,再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

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