吡咯啉-5-羧酸還原酶P5CR測(cè)試盒_氨基酸代謝
測(cè)定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣
注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
吡咯啉-5-羧酸還原酶P5CR測(cè)試盒_氨基酸代謝
測(cè)定意義：
吡咯啉-5-羧酸還原酶( P5CRs) 是普遍存在于原核和真核生物中的一類重要的管家蛋白。其主要功能是催化脯-氨酸生物合成的后一步反應(yīng)，將吡咯啉-5-羧酸( P5C) 轉(zhuǎn)化為脯-氨酸，在調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡等一系列病理和生理過(guò)程中起著重要作用。
測(cè)定原理：
P5CR 具有噻唑烷-4-羧酸脫氫酶活性，催化噻唑烷-4-羧酸的脫氫反應(yīng)，同時(shí)將 NAD 轉(zhuǎn)化為NADH，測(cè)定 340nm 下吸光值增加速率來(lái)反映酶的活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×2 瓶，-20℃保存；
粗酶液提取：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；12000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
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