糖代謝系列_山梨-醇脫氫酶(SH)測試盒
測定方法:微量法
產品規格:100管/96樣
注 意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
SH(EC 1.1.1.14)催化山梨-醇脫氫生成果糖,是調控生物體內山梨-醇含量的關健酶之一。
糖代謝系列_山梨-醇脫氫酶(SH)測試盒
測定原理:
SH催化山梨-醇脫氫生成果糖,同時還原NAD+生成NADH,測定340nm吸光度增加速率可以計算SH活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
1、細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
3、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟:
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零。
2、樣本測定
(1)在試劑二中加入7.6mL試劑一和11.4mL蒸餾水充分溶解,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴5min;用不完的試劑4℃保存一周;
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL試劑二,混勻,立即記錄340nm處20s時的吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1。