α-葡萄糖苷酶(α-GC)測試盒_糖代謝系列
測定方法:分光光度法
產品規格:50管/24樣
注 意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,催化水解芳基或烴基與糖基之間的α-糖苷鍵生成葡萄糖,不僅與細胞壁的松弛或加固有關,而且與細胞識別和一些信號分子產生密切相關。
α-葡萄糖苷酶(α-GC)測試盒_糖代謝系列
測定原理:
α-GC分解對-硝基苯-α-D吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯-酚,后者在400nm有大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算α-GC活性。
自備用品:
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×2瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入10mL蒸餾水,充分溶解備用;用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二:液體25mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體50mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1、細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。