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人胚腎上皮包裝細胞 GP2-293齊一生物科技(上海)有限公司產品已被廣泛應用于化學、化工、生命科學的基礎研究和開發應用、制藥、疾病診斷與控制、人口與健康、生物技術等諸多領域.客戶遍布國內各大學、研究所、醫院、衛生防疫、商品檢驗檢疫、制藥公司、生物技術公司和食品工業等單位.齊一生物科技(上海)有限公司:.Web:www.qiyibio。。com
人胚腎上皮包裝細胞 GP2-293細胞培養方法
1、收到細胞,請查看瓶子是否有破裂,培養基是否漏出,是否渾濁,如有請盡快。
2、收到細胞,如包裝完好,請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題,細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況,出現此狀態時,請不要打開細胞培養瓶,應立即將培養瓶置于細胞培養箱里靜止3-5小時左右,讓細胞先穩定下,再于顯微鏡下觀察,此時多數細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁,請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理
3. 收到細胞時如無異常情況 ,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養瓶中培養基吸出,留下 5-10ML培養基繼續培養:超過80%匯合度時,請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞,吸出培養液,1000轉/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。
4,將培養瓶置于37℃培養箱中培養,蓋子微微擰松。吸出的培養基可以保存在滅菌過的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時之需。
5 、24小時后,細胞形態已恢復并貼滿瓶壁,就可以傳代了。(貼壁細胞)將培養瓶里的培養基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細胞生長面為準)PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化,消化時間以具體細胞為準,一般1-3分鐘,不超過5分鐘。可以放入37℃培養箱消化。輕輕晃動瓶壁,見細胞脫落下來,加入3-5ml培養基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后將溶液吸入離心管內離心,1000rpm/5min。棄上清,視細胞數量決定分瓶數,一般一傳二,如細胞量多可一傳三,有些細胞不易傳得過稀,有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶,以具體細胞和經驗為準。(懸浮細胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
6,貼壁細胞 ,懸浮細胞。嚴格無菌操作。換液時,換新的細胞培養瓶和換新鮮的培養液,37度 5%CO2 培養
7. 收到細胞后,請鏡下觀察細胞,用恰當方式處理細胞。若懸浮的細胞較多,請離心收集細胞,接種到一個新的培養瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養基,使用進口胎牛血清. 剛接到細胞,若細胞不多時 血清濃度可以加到15%去培養。若細胞迏到80%左右 ,血清濃度還是在10%。
培養基參考
500ml基礎培養基(含:必需與非必需氨基酸、維他命、有機與無機成分、激素、生長因子與微量元素)、細胞生長添加劑、抗生素/抗菌素溶液或青霉素/鏈霉素(P/S)溶液、FBS,適合在飽和濕度為5%CO2與95%空氣的培養箱中使用
一、細胞操作參考書
二、生長特性:貼壁 懸浮
三、細胞生長條件:
培養基 90% (GIBCO)
血清 10% FBS(GIBCO)
溫度 37℃
空氣條件 5% CO2,,95% AIR
生長代數 P4
凍存條件 培養基70%、血清20%、DMSO10%
四、組成:
組份 規格
細胞一瓶 T25
細胞培養與操作說明 1份
五、細胞接收后的操作流程與注意事項
1.如果細胞為貼壁細胞,,而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態,請將懸浮的細胞即時離心,加15%血清的*培養基到新的培養皿/瓶繼續培養3天;同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養基,培養3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現增殖而是繼續脫落死亡,請及時實驗室,技術人員會跟進解決
2.貼壁細胞生長緩慢:適當提高血清濃度(zui高不能超過20%),或可根據該細胞生長密度,考慮胰酶消化后,轉移到新的培養瓶繼續培養
3.生長不均:貼壁細胞若出現分布不均,成島狀生長,可將細胞進行消化,重懸打散細胞,加入新鮮培養基進行培養
六、細胞常規培養傳代流程(請嚴格遵照無菌操作)
1.吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25%胰酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在1-2min)
2.鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰酶,加6~8ml *培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散
3.取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的*培養基,,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養
4.注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存
特別注意:(如使用公共實驗室或初次接觸細胞培養,建議添加雙抗培養)
1.收到細胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養基,如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基,請在原瓶培養基中額外添加10%的血清(原瓶培養基的繼續使用時間zui長不宜超過72小時)
2.貼壁細胞收到當天切忌立刻消化,請將細胞放置培養箱孵育過夜到第二天再做消化傳代
如簽收時出現培養瓶壁破裂,漏液等情況請及時做好照片記錄并實驗室
└ 肺成纖維細胞總DNA
└ 支氣管上皮細胞總DNA
└ 支氣管成纖維細胞總DNA
循環系統
└ 心肌細胞總DNA
└ 心肌成纖維細胞總DNA
└ 主動脈內皮細胞總DNA
└ 主動脈平滑肌細胞總DNA
└ 大隱靜脈平滑肌細胞總DNA
└ 冠狀動脈平滑肌細胞總DNA
消化系統
└ 食管上皮細胞總DNA
└ 食管平滑肌細胞總DNA
└ 腸平滑肌細胞總DNA
└ 腸粘膜上皮細胞總DNA
└ 腸動脈內皮細胞總DNA
└ 腸靜脈內皮細胞總DNA
└ 肝實質細胞總DNA
└ 肝動脈內皮細胞總DNA
└ 肝動脈平滑肌細胞總DNA
└ 小腸血管內皮細胞總DNA
└ 小腸隱窩上皮細胞總DNA
└ 肝內膽管上皮細胞總DNA
└ 胃粘膜上皮細胞總DNA
└ 肝竇內皮細胞總DNA
腦和神經系統
└ 腦動脈血管內皮細胞總DNA
└ 腦動脈血管平滑肌細胞總DNA
└ 腦靜脈血管內皮細胞總DNA
└ 腦靜脈血管平滑肌細胞總DNA
└ 腦膜細胞總DNA
└ 神經元細胞總DNA
└ 神經膠質細胞總DNA
└ 海馬神經元細胞總DNA
└ 腦微血管內皮細胞總DNA
└ 腦成纖維細胞總DNA
└ 神經小膠質細胞總DNA
└ 雪旺氏細胞總DNA
骨、關節、肌肉、皮膚系統
└ 骨細胞總DNA
└ 滑膜細胞總DNA
└ 骨骼肌細胞總DNA
└ 表皮角化細胞總DNA
└ 真皮成纖維細胞總DNA
└ 軟骨細胞總DNA
└ 破骨細胞總DNA
└ 皮膚肥大細胞總DNA
└ 前脂肪細胞總DNA
內分泌系統
└ 胰島β細胞總DNA
└ 胰腺星狀細胞總DNA
└ 胰腺導管上皮細胞總DNA
└ 頜下腺上皮細胞總DNA
眼、耳、鼻、喉、口腔系統
└ 視網膜微血管內皮細胞總DNA
└ 小梁網細胞總DNA
└ 視網膜色素上皮細胞總DNA
└ 視網膜muller細胞總DNA
└ 虹膜色素上皮細胞總DNA
└ 晶狀體上皮細胞總DNA
└ 角膜上皮細胞總DNA
└ 角膜內皮細胞總DNA
└ 視網膜神經節細胞總DNA
血液、淋巴系統
Acryl-Glide wipes 即用型PAGE電泳玻璃板硅化處理試劑 /
Acrylic acid 丙烯酸 [79-10-7]
Actin 肌動蛋白 /
ADA buffer, disodium salt ADA緩沖液二鈉鹽 [41689-31-0]
ADA buffer, disodium salt ADA緩沖液二鈉鹽 [41689-31-0]
Adamantane 金剛烷 [281-23-2]
Adamantanecarboxylic Acid 1-金剛烷甲酸 [828-51-3]
1-Adamantanol 1-溴金剛烷醇 [768-95-6]
2-Adamantanol 2-金剛烷醇 [700-57-2]
2-Adamantanone 2-金剛烷酮 [700-58-3]
1-Adamantylamine hydrochloride 鹽酸金剛烷胺 [665-66-7]
Adenine 腺嘌呤 [73-24-5]
Agarose N 瓊脂糖N [9012-36-6]
Agarose N 瓊脂糖N [9012-36-6]
L-Alaninamide Hydrochloride L-丙氨酰胺鹽酸鹽 [33208-99-0]
Adenine 腺嘌呤 [73-24-5]
Adenine phosphate salt 腺嘌呤磷酸鹽 [70700-30-0]
Adenine sulfate 腺嘌呤硫酸鹽 [321-30-2]
Adenine sulfate 腺嘌呤硫酸鹽 [321-30-2]
Adenosine 腺嘌呤核苷 [58-61-7]
Adenosine 腺嘌呤核苷 [58-61-7]
Adenosine 腺嘌呤核苷 [58-61-7]
Adenosine-3',5'-cyclic monophosphate 腺苷3',5’環磷酸 [37839-81-9]
Adenosine deaminase 15U/mg 腺苷脫氨酶 [9026-93-1]
ADP;Adenosine-5’-diphosphate, disodium salt 5’-二磷酸腺苷二鈉鹽 [16178-48-6]
AMP;Adenosine-5’-monophosphate, free acid 5’-單磷酸腺苷 [18422-05-4]
AMP;Adenosine-5’-monophosphate, free acid 5’-單磷酸腺苷 [18422-05-4]
AMP disodium, hexahydrate ;Adenosine-5’-monophosphate, disodium, hexahydrate 5’-單磷酸腺苷二鈉鹽六水 [4578-31-8]
Agarose M 瓊脂糖M [9012-36-6]
Agarose M 瓊脂糖M [9012-36-6]
Azure B 天青B [531-55-5]
AMP disodium, hexahydrate ;Adenosine-5’-monophosphate, disodium, hexahydrate 5’-單磷酸腺苷二鈉鹽六水 [4578-31-8]
ATP disodium salt, trihydrate; Adenosine 5’-triphosphate, disodium salt, trihydrate 5’-三磷酸腺苷二鈉鹽三水 [51963-61-2]
ATP disodium salt, trihydrate; Adenosine 5’-triphosphate, disodium salt, trihydrate 5’-三磷酸腺苷二鈉鹽三水 [51963-61-2]
ATP Solution(100mM) ;Adenosine 5’-triphosphate solution 100mM 5’-三磷酸腺苷二鈉溶液(100mM) /
S-Adenosyl-L-methionine S-腺苷 [29908-03-0]
Adipic acid 己二酸 [124-04-9]
4-(2-Aminoethyl)benzenesulfonyl fluoride,hydrochloride 4-2-胺乙基苯磺酰氟鹽酸鹽 [30827-99-7]
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