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人子宮內膜腺癌細胞 HEC-1-B細胞培養方法
1、收到細胞,請查看瓶子是否有破裂,培養基是否漏出,是否渾濁,如有請盡快。
2、收到細胞,如包裝完好,請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題,細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況,出現此狀態時,請不要打開細胞培養瓶,應立即將培養瓶置于細胞培養箱里靜止3-5小時左右,讓細胞先穩定下,再于顯微鏡下觀察,此時多數細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁,請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理
3. 收到細胞時如無異常情況 ,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養瓶中培養基吸出,留下 5-10ML培養基繼續培養:超過80%匯合度時,請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞,吸出培養液,1000轉/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。
4,將培養瓶置于37℃培養箱中培養,蓋子微微擰松。吸出的培養基可以保存在滅菌過的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時之需。
5 、24小時后,細胞形態已恢復并貼滿瓶壁,就可以傳代了。(貼壁細胞)將培養瓶里的培養基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細胞生長面為準)PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化,消化時間以具體細胞為準,一般1-3分鐘,不超過5分鐘。可以放入37℃培養箱消化。輕輕晃動瓶壁,見細胞脫落下來,加入3-5ml培養基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后將溶液吸入離心管內離心,1000rpm/5min。棄上清,視細胞數量決定分瓶數,一般一傳二,如細胞量多可一傳三,有些細胞不易傳得過稀,有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶,以具體細胞和經驗為準。(懸浮細胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
6,貼壁細胞 ,懸浮細胞。嚴格無菌操作。換液時,換新的細胞培養瓶和換新鮮的培養液,37度 5%CO2 培養
7. 收到細胞后,請鏡下觀察細胞,用恰當方式處理細胞。若懸浮的細胞較多,請離心收集細胞,接種到一個新的培養瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養基,使用進口胎牛血清. 剛接到細胞,若細胞不多時 血清濃度可以加到15%去培養。若細胞迏到80%左右 ,血清濃度還是在10%。
培養基參考
500ml基礎培養基(含:必需與非必需氨基酸、維他命、有機與無機成分、激素、生長因子與微量元素)、細胞生長添加劑、抗生素/抗菌素溶液或青霉素/鏈霉素(P/S)溶液、FBS,適合在飽和濕度為5%CO2與95%空氣的培養箱中使用
一、細胞操作參考書
二、生長特性:貼壁 懸浮
三、細胞生長條件:
培養基 90% (GIBCO)
血清 10% FBS(GIBCO)
溫度 37℃
空氣條件 5% CO2,,95% AIR
生長代數 P4
凍存條件 培養基70%、血清20%、DMSO10%
四、組成:
組份 規格
細胞一瓶 T25
細胞培養與操作說明 1份
五、細胞接收后的操作流程與注意事項
1.如果細胞為貼壁細胞,,而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態,請將懸浮的細胞即時離心,加15%血清的*培養基到新的培養皿/瓶繼續培養3天;同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養基,培養3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現增殖而是繼續脫落死亡,請及時實驗室,技術人員會跟進解決
2.貼壁細胞生長緩慢:適當提高血清濃度(zui高不能超過20%),或可根據該細胞生長密度,考慮胰酶消化后,轉移到新的培養瓶繼續培養
3.生長不均:貼壁細胞若出現分布不均,成島狀生長,可將細胞進行消化,重懸打散細胞,加入新鮮培養基進行培養
六、細胞常規培養傳代流程(請嚴格遵照無菌操作)
1.吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25%胰酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在1-2min)
2.鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰酶,加6~8ml *培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散
3.取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的*培養基,,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養
4.注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存
特別注意:(如使用公共實驗室或初次接觸細胞培養,建議添加雙抗培養)
1.收到細胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養基,如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基,請在原瓶培養基中額外添加10%的血清(原瓶培養基的繼續使用時間zui長不宜超過72小時)
2.貼壁細胞收到當天切忌立刻消化,請將細胞放置培養箱孵育過夜到第二天再做消化傳代
如簽收時出現培養瓶壁破裂,漏液等情況請及時做好照片記錄并實驗室
小鼠胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA 試劑盒
小鼠ELISA 試劑盒
小鼠降鈣素(CT)ELISA 試劑盒
小鼠抗卵白蛋白特異性IgE (OVE-IsgE)ELISA 試劑盒
小鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA 試劑盒
小鼠免疫球蛋白M(IgM)ELISA 試劑盒
小鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA 試劑盒
小鼠前列腺特異性抗原(PSA)ELISA 試劑盒
小鼠白細胞介素2(IL-2)ELISA 試劑盒
小鼠白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA 試劑盒
小鼠白細胞介素5(IL-5)ELISA 試劑盒
小鼠白介素13(IL-13)ELISA 試劑盒
小鼠谷氨酸脫氫酶(GLDH)ELISA 試劑盒
小鼠致癌基因相關蛋白KCELISA 試劑盒
小鼠心肌營養素1(CT-1)ELISA 試劑盒
小鼠表皮調節素(EPR)ELISA 試劑盒
小鼠脫碘酶(ID)ELISA 試劑盒
小鼠角化細胞分泌因子ELISA 試劑盒
小鼠谷胱甘肽-過氧化物酶(GSH-PX)ELISA 試劑盒
小鼠表皮生長因子(EGF)ELISA 試劑盒
小鼠肝素結合性表皮生長因子(HB-EGF)ELISA 試劑盒
小鼠尿微量蛋白(mALB)ELISA 試劑盒
小鼠乳酸脫氫酶(LDH)ELISA 試劑盒
小鼠白細胞介素35(IL-35)ELISA 試劑盒
小鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)ELISA 試劑盒
小鼠肝細胞生長因子(HGF)ELISA 試劑盒
小鼠白細胞介素1β(IL-1β)ELISA 試劑盒
小鼠組胺(HIS)ELISA 試劑盒
小鼠堿性磷酸酶(ALP)ELISA 試劑盒
小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA 試劑盒
小鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA 試劑盒
小鼠增殖細胞核抗原(PCNA)ELISA 試劑盒
小鼠酸性磷酸酶(ACP)ELISA 試劑盒
小鼠免疫球蛋白G2a(IgG2a)ELISA 試劑盒
小鼠免疫球蛋白G1IgG1)ELISA 試劑盒
小鼠5羥色胺(5-HT)ELISA 試劑盒
小鼠(Cortisol)ELISA 試劑盒
小鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA 試劑盒
小鼠載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA 試劑盒
小鼠α干擾素(IFN-α)ELISA 試劑盒
小鼠誘導型NO合酶(iNOS)ELISA 試劑盒
小鼠3-硝基酪氨酸(3-NT)ELISA 試劑盒
小鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA 試劑盒
小鼠白細胞介素6(IL-6)ELISA 試劑盒
小鼠IgG Fc片段(IgGFcγ)ELISA 試劑盒
小鼠仙臺病毒(Sendai)ELISA 試劑盒
小鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA 試劑盒
小鼠支原體ELISA 試劑盒
小鼠泰澤病原體ELISA 試劑盒
小鼠棒狀桿菌ELISA 試劑盒
小鼠肝炎病毒(MHV)ELISA 試劑盒
小鼠鼠痘病毒(MPV)ELISA 試劑盒
小鼠鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH IgG)ELISA 試劑盒
小鼠鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH IgM)ELISA 試劑盒
小鼠前列腺素 E2(PGE2)ELISA 試劑盒
小鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA 試劑盒
小鼠神經肽Y(NP-Y)ELISA 試劑盒
小鼠皮質酮(CS)ELISA 試劑盒
小鼠血管緊張素轉換酶(ACE)ELISA 試劑盒
小鼠琥珀酸脫氫酶(SDH)ELISA 試劑盒
小鼠Na-K-ATP酶ELISA 試劑盒
小鼠細胞色素氧化酶(CC0)ELISA 試劑盒
小鼠Ca-ATP酶ELISA 試劑盒
2 x YT Agar-capsule 培養基
2 x YT Top Agar 培養基
2 x YT Top Agar-capsule 培養基
非酶多糖清除劑
固相RNase 清除劑
液相RNase 清除劑
非酶DNA清除劑
液相內毒素清除劑
液相內毒素清除劑
固相內毒素清除劑
非酶RNA清除劑-1
非酶RNA清除劑-2
溴化乙錠清除液(溶液A)
溴化乙錠清除液(溶液B)
DNA UV 防護劑
血清白蛋白清除劑(溶液A)
血清白蛋白清除劑(溶液B)
Water-DEPC treate DEPC水
β-Sitosterol β-谷甾醇
ACES N-(2-乙酰胺基)-2-氨基乙磺酸
Acetaldehyde 40% solution 40%乙醛溶液
Acetaldehyde oxime 乙醛肟
Acetamide 乙酰胺
4-Acetamidobenzaldehyde 4-乙酰氨基苯甲醛
Acetamidophenol 4-乙酰氨基酚
Acetovanillone 香草酮
Acetosyringone 乙酰丁香酮
4-Acetylbenzoic acid 4-乙酰基苯甲酸
Acetic Acid 乙酸
Brilliant yellow 燦爛黃
Ampicillin, sodium salt 氨芐青霉素鈉
Acetic Acid 乙酸
Acetoacetaniline 乙酰基乙酰苯胺
1-Acetonaphthone 1-萘乙酮
2-Acetonaphthone 2-萘乙酮
Acetonitrile 乙腈
3-(α-Acetonylbenzyl)-4-hydroxycoumarin, sodium salt 鈉
Acetone oxime 丙酮肟
N-Acetyl-DL-alanine N-乙酰-DL-
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