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人腎小球系膜細胞 HMC細胞培養方法
1、收到細胞,請查看瓶子是否有破裂,培養基是否漏出,是否渾濁,如有請盡快。
2、收到細胞,如包裝完好,請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題,細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況,出現此狀態時,請不要打開細胞培養瓶,應立即將培養瓶置于細胞培養箱里靜止3-5小時左右,讓細胞先穩定下,再于顯微鏡下觀察,此時多數細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁,請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理
3. 收到細胞時如無異常情況 ,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養瓶中培養基吸出,留下 5-10ML培養基繼續培養:超過80%匯合度時,請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞,吸出培養液,1000轉/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。
4,將培養瓶置于37℃培養箱中培養,蓋子微微擰松。吸出的培養基可以保存在滅菌過的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時之需。
5 、24小時后,細胞形態已恢復并貼滿瓶壁,就可以傳代了。(貼壁細胞)將培養瓶里的培養基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細胞生長面為準)PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化,消化時間以具體細胞為準,一般1-3分鐘,不超過5分鐘。可以放入37℃培養箱消化。輕輕晃動瓶壁,見細胞脫落下來,加入3-5ml培養基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后將溶液吸入離心管內離心,1000rpm/5min。棄上清,視細胞數量決定分瓶數,一般一傳二,如細胞量多可一傳三,有些細胞不易傳得過稀,有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶,以具體細胞和經驗為準。(懸浮細胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
6,貼壁細胞 ,懸浮細胞。嚴格無菌操作。換液時,換新的細胞培養瓶和換新鮮的培養液,37度 5%CO2 培養
7. 收到細胞后,請鏡下觀察細胞,用恰當方式處理細胞。若懸浮的細胞較多,請離心收集細胞,接種到一個新的培養瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養基,使用進口胎牛血清. 剛接到細胞,若細胞不多時 血清濃度可以加到15%去培養。若細胞迏到80%左右 ,血清濃度還是在10%。
培養基參考
500ml基礎培養基(含:必需與非必需氨基酸、維他命、有機與無機成分、激素、生長因子與微量元素)、細胞生長添加劑、抗生素/抗菌素溶液或青霉素/鏈霉素(P/S)溶液、FBS,適合在飽和濕度為5%CO2與95%空氣的培養箱中使用
美國ATCC簡介:美國菌種保藏中心, 又稱美國模式菌種收集中心(ATCC),是位于馬里蘭洲洛克菲勒的一家私營的,非贏利性組織。目前它可以提供各種動植物細胞、標準品、菌株達兩萬多種。ATCC成立于1925年,是世界上zui大的生物資源中心,由美國14家生化、醫學類行業協會組成的理事會負責管理,是一家性、非盈利生物標準品資源中心。ATCC向發布其獲取、鑒定、保存及開發的生物標準品,推動科學研究的驗證、應用及進步 ATCC可以提供以下類別生物標準品:細胞株(3000多種);菌株(15000多種);動植物病毒株(2500多種)以及重組物質等。
現已成為可信賴的活體微生物、細胞系等獲得、保存和發放的國家資源中心。ATCC有29,000多種不同品系可靠的動物細胞和微生物培養體,它能滿足各科學團體對可信賴品系的需要。僅1981年就有39,000多培養物發放給*的科學工作者,并成功地用冷凍和冷凍干燥的方法保存各種細胞品系。 ATCC是一個非(學會單位)無利潤的公司,由各科學組織推選成員組成理事會進行管理。現有工作人員125人。參加的科學團體有:美國免疫協會、美國生物化學會、美國細胞生物學會、美國微生物學會、美國動物學會、美國遺傳學會、原生動物學會和組織培養協會等16個學術組織。在ATCC可利用各種材料以及工具和設備進行廣泛的研究。主要研究項目有:酶聯免疫吸附分析技術(ELISA),真核細胞轉錄的調控,雜交瘤、淋巴類和髓類以及其他細胞系的建立,人突變細胞系的基因蛋白質,借助計算機進行鑒別分析,培養物的特征鑒別和保存技術的改進,關于化學致癌、致畸和致突變的。
大鼠血管內皮細胞生長因子B(VEGF-B)ELISA 試劑盒
大鼠白介素12(IL-12/P40)ELISA 試劑盒
大鼠血管內皮細胞生長因子C(VEGF-C)ELISA 試劑盒
大鼠白介素11(IL-11)ELISA 試劑盒
大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白4(IGFBP-4)ELISA 試劑盒
大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)ELISA 試劑盒
大鼠血管內皮細胞生長因子D(VEGF-D)ELISA 試劑盒
大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白2(IGFBP-2)ELISA 試劑盒
大鼠血管內皮細胞生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)ELISA 試劑盒
大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)ELISA 試劑盒
大鼠血管內皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)ELISA 試劑盒
大鼠肝細胞生長因子(HGF)ELISA 試劑盒
大鼠糖蛋白130(gp130)ELISA 試劑盒
大鼠生長激素(GH)ELISA 試劑盒
大鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA 試劑盒
大鼠中性粒細胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA 試劑盒
大鼠FMS樣酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA 試劑盒
大鼠FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt3L)ELISA 試劑盒
大鼠堿性成纖維細胞生長因子9(bFGF-9)ELISA 試劑盒
大鼠堿性成纖維細胞生長因子4(bFGF-4)ELISA 試劑盒
大鼠堿性成纖維細胞生長因子6(bFGF-6)ELISA 試劑盒
大鼠酸性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)ELISA 試劑盒
大鼠凋亡相關因子配體(FASL) ELISA 試劑盒
大鼠凋亡相關因子(FAS/CD95)ELISA 試劑盒
大鼠紅細胞生成素受體(EPOR)ELISA 試劑盒
大鼠嗜酸粒細胞趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA 試劑盒
大鼠嗜酸粒細胞趨化因子(ECF)ELISA 試劑盒
大鼠內分泌腺來源的血管內皮生長因子(EG-VEGF)ELISA 試劑盒
大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)ELISA 試劑盒
大鼠可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)酶聯免疫分析大鼠可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)酶聯免疫分析體(sEPCR)ELISA 試劑盒
大鼠CD30分子(CD30)ELISA 試劑盒
大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白(E-Cad)ELISA 試劑盒
大鼠β細胞素(BTC)ELISA 試劑盒
大鼠血管生成素1(ANG-1)ELISA 試劑盒
大鼠血管生長素(ANG)ELISA 試劑盒
大鼠角化細胞內分泌因子(KAF)/雙調蛋白(AR)ELISA 試劑盒
大鼠白細胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA 試劑盒
大鼠白介素9(IL-9)ELISA 試劑盒
大鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISA 試劑盒
大鼠轉化生長因子α(TGF-α)ELISA 試劑盒
大鼠孕激素/孕酮(PROG)ELISA 試劑盒
大鼠雌激素(E)ELISA 試劑盒
大鼠血管內皮細胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA 試劑盒
大鼠白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA 試劑盒
大鼠脂聯素(ADP)ELISA 試劑盒
大鼠游離β絨毛膜促性腺激素(f-βCG)ELISA 試劑盒
大鼠醛固酮(ALD)ELISA 試劑盒
大鼠去甲腎上腺素(NA)ELISA 試劑盒
大鼠前列腺素F(PGF)ELISA 試劑盒
大鼠前列腺素E1(PGE1)ELISA 試劑盒
大鼠內皮素1(ET-1)ELISA 試劑盒
大鼠血管舒緩激肽(BK)ELISA 試劑盒
大鼠抵抗素(Resistin)ELISA 試劑盒
大鼠催乳素(PRL)ELISA 試劑盒
大鼠促生長激素釋放激素(GRH)ELISA 試劑盒
大鼠促卵泡素(FSH)ELISA 試劑盒
大鼠雌二醇受體(ER)ELISA 試劑盒
大鼠前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA 試劑盒
大鼠大內皮素(Big ET)ELISA 試劑盒
大鼠大內皮素(Big ET)ELISA 試劑盒
大鼠遲現抗原(VLA)ELISA 試劑盒
大鼠降鈣素(CT)ELISA 試劑盒
大鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA 試劑盒
大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA 試劑盒
大鼠促甲狀腺素(TSH)ELISA 試劑盒
大鼠脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S)ELISA 試劑盒
Phenyl Sefinose 6 Fast Flow (low sub,LS) 標準載量苯基疏水色譜柱料
Phenyl Sefinose 6 Fast Flow (high sub,HS) 高載量苯基疏水色譜柱料
Phenyl Sefinose 6 Fast Flow (high sub,HS) 高載量苯基疏水色譜柱料
Blue SefinoseTM 6 Fast Flow 蘭色色譜柱料
Blue SefinoseTM 6 Fast Flow 蘭色色譜柱料
Protein G SefinoseTM Resin (Settled Resin)
Protein G SefinoseTM Resin (Settled Resin)
NHS-activated SefinoseTM 4 Fast Flow
SG-Arginine-C?
SG-Aspartic-N?
SG-Chymotrypsin?
SG-Glutamic-C?
SG-Lysine-C?
SATA
Protein Stains L無毒型蛋白質快速染色試劑盒
BCA Protein Assay KitBCA蛋白質定量檢測試劑盒
Bradford Protein Assay KitBradford 蛋白質定量檢測試劑盒
Bradford Protein Assay KitBradford 蛋白質定量檢測試劑盒
Modified Bradford Protein Assay Kit改良型Bradford蛋白濃度測定試劑盒
Modified BCA Protein Assay Kit 改良型BCA蛋白濃度測定試劑盒
Micro BCA Protein Assay KitBCA法微量蛋白濃度測定試劑盒
Non-Interference Protein Assay Kit非干擾型蛋白濃度測定試劑盒
Lowry Protein Assay Kit福林酚蛋白濃度測定試劑盒
Lowry Protein Assay Kit福林酚蛋白濃度測定試劑盒
Modified Lowry Protein Assay Kit 改良型Lowry法蛋白濃度測定試劑盒
Stable Lowry Protein Assay Kit 穩定型Lowry法蛋白濃度測定試劑盒
BSA牛血清白蛋白溶液
Triton X-405
Triton X-405
Folin-Phenol Reagent 福林酚蛋白濃度測定試劑
Sulfo-NHS-Biotin
Sulfo NHS LC Biotin
NHS LC Biotin
Sulfo NHS
Sulfo NHS
Iodination Reagent
Iodination Reagent
Traut's Reagent
Western-Blot-Re-Probe SolutionWestern Blots---印跡膜再生液
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