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利用對(duì)人類(lèi)干細(xì)胞系進(jìn)行可誘導(dǎo)基因敲除

時(shí)間:2015-7-13閱讀:440
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近日,來(lái)自美國(guó)威斯康星大學(xué)的華人科學(xué)家Su-Chun Zhang在學(xué)術(shù)期刊Cell Stem Cell發(fā)表了一項(xiàng)研究進(jìn)展,他們利用CRISPR/CAS9技術(shù)實(shí)現(xiàn)了對(duì)人類(lèi)干細(xì)胞系進(jìn)行可誘導(dǎo)基因敲除,這一方法的成功對(duì)于研究基因在干細(xì)胞及分化不同階段中的作用具有重要推動(dòng)作用。

對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行的時(shí)間調(diào)控對(duì)于闡明一個(gè)基因在生物學(xué)系統(tǒng)中的功能至關(guān)重要,但到目前為止,在人類(lèi)多能干細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)可誘導(dǎo)基因敲除,建立可誘導(dǎo)基因敲除的人類(lèi)干細(xì)胞系仍存在很大挑戰(zhàn)。

在該項(xiàng)研究中,研究人員結(jié)合CRISPR/CAS9介導(dǎo)的基因組編輯和Flp/FRT以及Cre/LoxP系統(tǒng)成功實(shí)現(xiàn)建立了可誘導(dǎo)基因敲除的人類(lèi)多能干細(xì)胞系。研究人員發(fā)現(xiàn)dual-sgRNA的靶向作用對(duì)于將FRT序列進(jìn)行的雙等位基因敲入非常重要。除此之外,他們還開(kāi)發(fā)了出一種新的策略將一個(gè)可調(diào)控活性的重組酶表達(dá)體系同時(shí)導(dǎo)入細(xì)胞,移除了藥物抗性基因,利用這種方法可以加快iKO hPSC細(xì)胞系的獲得速度。

研究人員通過(guò)這種兩步法敲除策略,對(duì)人類(lèi)胚胎干細(xì)胞和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞中的SOX2,PAX6,OTX2,AGO2等基因?qū)崿F(xiàn)了可誘導(dǎo)性基因敲除,建立了相關(guān)細(xì)胞系。

研究人員相信,利用這種方法建立iKO hPSC細(xì)胞系將會(huì)改變?nèi)藗円酝鶎?duì)人類(lèi)細(xì)胞中基因功能研究的方式,對(duì)于推動(dòng)干細(xì)胞研究進(jìn)展具有重要意義hzA047Hu    人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)ELISA試劑盒原理    ELISA Kit for Hepatocyte Growth Factor (HGF)
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