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利用對人類干細胞系進行可誘導基因敲除

時間:2015-7-13閱讀:437
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近日,來自美國威斯康星大學的華人科學家Su-Chun Zhang在學術期刊Cell Stem Cell發(fā)表了一項研究進展,他們利用CRISPR/CAS9技術實現(xiàn)了對人類干細胞系進行可誘導基因敲除,這一方法的成功對于研究基因在干細胞及分化不同階段中的作用具有重要推動作用。

對基因表達進行的時間調(diào)控對于闡明一個基因在生物學系統(tǒng)中的功能至關重要,但到目前為止,在人類多能干細胞中實現(xiàn)可誘導基因敲除,建立可誘導基因敲除的人類干細胞系仍存在很大挑戰(zhàn)。

在該項研究中,研究人員結(jié)合CRISPR/CAS9介導的基因組編輯和Flp/FRT以及Cre/LoxP系統(tǒng)成功實現(xiàn)建立了可誘導基因敲除的人類多能干細胞系。研究人員發(fā)現(xiàn)dual-sgRNA的靶向作用對于將FRT序列進行的雙等位基因敲入非常重要。除此之外,他們還開發(fā)了出一種新的策略將一個可調(diào)控活性的重組酶表達體系同時導入細胞,移除了藥物抗性基因,利用這種方法可以加快iKO hPSC細胞系的獲得速度。

研究人員通過這種兩步法敲除策略,對人類胚胎干細胞和誘導多能干細胞中的SOX2,PAX6,OTX2,AGO2等基因?qū)崿F(xiàn)了可誘導性基因敲除,建立了相關細胞系。

研究人員相信,利用這種方法建立iKO hPSC細胞系將會改變?nèi)藗円酝鶎θ祟惣毎谢蚬δ苎芯康姆绞剑瑢τ谕苿痈杉毎芯窟M展具有重要意義hzA047Hu    人肝細胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒原理    ELISA Kit for Hepatocyte Growth Factor (HGF)
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