RSC96大鼠雪旺細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)RSC96大鼠雪旺細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
MonopotassiuM Phosphate 磷酸二氫鉀 7778-77-0
Monukast Methyl Ketone 孟魯司特甲酮 937275-23-5
Moracin C 5-(6-羥基-2-苯并呋喃基)-2-(3-甲基-2-丁烯基)-1,3-苯二醇 69120-06-5
Moracin D 桑辛素 D 69120-07-6
Mordant blue 13 (C.I. 16680) 7361-97-9
Mordant Yellow 26 媒介黃 26 6232-49-1
Morphine hydrochloride 硫酸* 52-26-6
Morpholin-2-one 4441-15-0
MORPHOLINE-2,2,3,3,5,5,6,6-D8 MORPHOLINE-D8 HCL 342611-02-3
Morus nigra 黑桑(MORUS NIGRA)葉提取物 90064-11-2
MOSAPRAMINE 莫沙帕明 89419-40-9
MOXESTROL 34816-55-2
MoxicouMone 嗎西香豆素 17692-56-7
Polyethylene Glycol 4000 聚乙二醇 25322-68-3
MRS 1220 MRS 1220;9-CHLORO-2-(2-FURANYL)-5-[(PHENYLACETY)AMINO][1,2,4]-TRIAZOLO[1,5-C] QUINAZOLINE;N-[9-CHLORO-2-(2-FURANYL)[1,2,4]-TRIAZOLO[1,5-C]QUINAZOLIN-5-YL]BENZENE ACETAMIDE;MRS 1220;9-CHLORO-2-(2-FURANYL)-5-((PHENYLACETYL)AMINO)-[1,2,4]TRIAZOLO[1,5-C]QUINAZOLINE 183721-15-5
MTH-GLYCINE 694-68-8
Mucins subMandibular 粘蛋白 84195-52-8
MucobroMic acid 粘溴酸 488-11-9
Mucopolysaccharides, glycosaMinoglycans, chondroitin sulfate-derMatan sulfate-contg., skin 葡糖氨基葡聚糖 94945-04-7
Muristerone A 38778-30-2
Musa paradisiaca extract 大蕉(MUSA SAPIENTUM)果提取物 89957-82-4
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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