H9c22-1大鼠心肌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)H9c22-1大鼠心肌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
MiniMuM purity of 98% for 350 graMs 1-芐基哌啶 2905-56-8
MiniMuM x 1 or 1g x 1, 5g x 1 2,5-二溴苯-1,4-二甲醛 63525-48-4
Minoxidil * 38304-91-5
MiraMistin 126338-77-0
MIRODENAFIL 5-乙基-3,5-二氫-2-[5-[[4-(2-羥乙基)-1-哌嗪基]磺酰]-2-丙氧基苯基]-7-丙基-4H-吡咯并[3,2-D]嘧啶-4-酮 862189-95-5
Mitoflaxone 米托拉酮 87626-55-9
MitoMycin A 4055-39-4
MKT077 147366-41-4
MN(TMHD)3 三(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚烯酸)鎂 14324-99-3
MnTe Manganese luride 碲化錳 12032-88-1
Molasses 環己基氨基磺酸鈉 68476-78-8
MolybdenuM,biso,o-bis(2-ethylhexyl) phosphorodithioato-ks,ks 磺化的二-2-乙己基二硫代磷酸氧代鉬 72030-25-2
MoMetasone 莫美他松 105102-22-5
MoMordicoside I aglycone 苦瓜皂苷 I 糖苷 81910-41-0
Monepan 887148-69-8
N-MethylacetoacetaMide N-甲基乙酰基乙酰胺 20306-75-6
Mono-6-O-(p-toluenesulfonyl)-gaMMa-cyclodextrin 單-6-O-對甲苯磺酰-Γ-環糊精 97227-33-3
Monochloroacetic acid /Chloroacetic 1979/11/8
Monocrotaline 單響尾蛇毒蛋白 315-22-0
MONO-FMOC ETHYLENE DIAMINE HYDROCHLORIDE N-芴甲氧羰基乙二胺鹽酸鹽 391624-46-7
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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