LLC-MK2恒河猴腎細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)LLC-MK2恒河猴腎細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞 ,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
triptorelin paMoate * 57773-63-4
triptycene 三蝶烯 477-75-8
triptycene-9-carboxylic acid 4423-49-8
TitaniuM, dichlorooxo- 13780-39-7
Titanocene dichloride 二氯二茂鈦 1271-19-8
t-Ketotriazole 66627-72-3
TLCK 4238-41-9
TMPyPB 3,3'-[5'-[3-(3-吡啶基)苯基][1,1':3',1''-三聯(lián)苯]-3,3''-二基]二吡啶 921205-03-0
T3 疊氮基*基硅烷 4648-54-8
TRANS-1,4-DIBROMO-2-BUTENE 1,4-二溴丁烯-2 6974/12/5
TRANS-2-METHYLCYCLOHEXYLAMINE 反-2-甲基環(huán)已胺 931-10-2
trans-3-aMino-4-cyclobutyl-2-hydroxybut* hydrochloride (ALPHAR,BETAS)-BETA-氨基-ALPHA-羥基環(huán)丁烷丁酰胺鹽酸鹽 1036931-35-7
TRANS-L-3-HYDROXYPROLINE 反-3-羥基-L-* 4298/8/2
trans-3-MethylcyclobutanaMine 反式-3-甲基環(huán)丁胺 20826-77-1
trans-3-Pentenoic Acid 3-戊烯酸 1617-32-9
trans-4-[4-[[[5-[(3,4-Difluorophenyl)aMino]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]carbonyl]aMino]phenyl]cyclohexaneacetic acid 反式-4-[4-[[[5-[(3,4-二氟苯基)氨基]-1,3,4-惡二唑-2-基]羰基]氨基]苯基]環(huán)己烷乙酸 892489-52-0
TRANS-4-AMINOCROTONIC ACID 7-氨基-3-[(1H-1,2,3-三唑-4-硫代)甲基]-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸 38090-53-8
Trans-4-chloro-2-butene-1-ol 1775-39-9
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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