Hepa 1-6肝癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體Hepa 1-6肝癌細胞):
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
5-Phenyl-triazole-3-carboxylic acid ethyl ester 31197-17-8
Heptyl-2-naphthol 31215-04-0
2-Methyltetrahydrofuran-3-one 2-甲基四氫呋喃-3-酮 3188-00-9
4-Cyanobutyric acid 4-氰基丁酸 39201-33-7
Methyl 3,3-diacetylpropanoate 3,3-二乙酰基丙酸甲酯 39265-95-7
3-[3-[2-(1-Piperidinyl)ethoxy]phenyl]-5-(1H-1,2,4-triazol-5-yl)-1H-indazole 3-[3-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-5-(1H-1,2,4-三唑-5-基)-1H-吲唑 395104-30-0
EtizolaM 乙替唑侖 40054-69-1
Glyoxal diMethyl acetal, 60% aq. soln. 乙二醛-1,1-二甲基乙縮醛溶液 51673-84-8
Raltegravir 雷特格韋 518048-05-0
2-amino-5-hydroxyvaleric acid 2-氨基-5-羥基戊酸 533-88-0
2-Methylundecanal 2-甲基十一醛 110-41-8
gaMMa-Oryzanol * 11042-64-1
Insulin froM bovine pancreas 胰島素 11070-73-8
Ethyl L-alaninate hydrochloride L-*乙酯鹽酸鹽 1115-59-9
DIBROMOMALEIC ANHYDRIDE 1122-12-9
4-BROMO-2-FLUOROBENZYLAMINE 4-溴-2-氟芐胺 112734-22-2
4-(1'-CARBOXYL-CYCLOPROPYL)PHENYLBORONIC ACID 4-(1'-羧基L-環丙基)苯硼酸 1159489-46-9
HidrosMin 生物黃酮素 115960-14-0
tetrafluoroethylene 四氟乙烯 116-14-3
FlurazepaM dihydrochloride 鹽酸氟安定 1172-18-5
2,4,6-Trinitrotoluene 2,4,6-三硝基甲苯 118-96-7
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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