HeLa 229宮頸癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)HeLa 229宮頸癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
(2-AMINO-ETHYL)-UREA HCL 858001-69-1
[2-(aMinoMethyl)phenyl]Methanol 2-(氨基甲基)芐醇 4152-92-5
-(2-CARBOXY-2-CYANOVINYL)JULOLIDINE 142978-18-5
2-(chloroethyl)MethylaMine (2-CHLORO-ETHYL)-METHYL-AMINE 32315-92-7
(2E)-(6-Methoxy-2,3-dihydro-1H-inden-1-ylidene)ethanenitrile 187871-98-3
(2E)-3-(4-Chlorophenyl)acryloyl chloride 95602-71-4
(2E)-4-(DiMethylaMino)but-2-enoic acid 98548-82-4
(2E)-but-2-enedioic acid 24461-32-3
Methyl (E,E,Z)-2,4,6-Decatrienoate 51544-64-0
(2E,4Z,6E,8E)-3,7-diMethyl-9-(2,6,6-triMethyl-1-cyclohexenyl)nona-2,4,6,8-tetraen-1-ol 22737-96-8
(2-ETHYLHEXYL) PHOSPHATE 磷酸-2-乙基己酯 1070-03-7
Fluoroacetic anhydride 407-33-0
(2-Fluorophenyl) Methyl cyanocarboniMidodithioate 152382-00-8
Hydroxypropyl-beta-cyclodextrin 羥丙基-BETA-環糊精 128446-35-5
(2-hydroxypropyl)triMethylaMMoniuM 7562-87-0
(2-OXO-1,3-OXAZOLIDIN-3-YL)ACTETIC ACID (2-氧代-1,3-惡唑烷酮-3-基)乙酸 75125-23-4
(2-Propenyloxy)propanol 丙二醇單烯丙基醚 1331-17-5
PYRROLIDIN-2-YLMETHANAMINE 吡咯烷-2-甲胺 57734-57-3
(R)-(-)-1-BENZYLOXY-2-PROPANOL (R)-(-)-1-芐氧基-2-丙醇 89401-28-5
(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-aMino-5-(diaMinoMethylideneaMino)pen tanoyl]aMino]hexanoyl]aMino]hexanoyl]aMino]-N-[(1R)-1-[[(1R)-1-[[(1R)- 1-[[(1R)-1-[[(1R)-1-carbaMoyl-2-(4-hydroxyphenyl)ethyl]carbaMoylMethyl carbaMoyl]pentyl]carbaMoyl]pentyl]carbaMoy 287096-87-1
(2R,3R)-2,3-EPOXYBUTANE TRANS 1758-32-3
(2R,3R)-3-(PhenylMethoxy)-1,2,4-butanetriol 84379-52-2
(2R,3R,4S,5R)-2-[6-(hydroxyaMino)purin-9-yl]-5-(hydroxyMethyl)oxolane-3,4-diol 3414-62-8
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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