A-431表皮癌細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)A-431表皮癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
(R)-(+)-trans-4-(1-AMinoethyl)-N-(4-pyridyl)cyclohexanecarboxaMide Dihydrochloride Monohydrate 反-4-[(1R)-1-氨基乙基]-N-4-吡啶-環(huán)己甲酰胺鹽酸鹽一水合物 331752-47-7
(R)-(+)-α,α-Diphenyl-2-pyrrolidineMethanol triMethylsilyl ether (2R)-2-[二苯基[(*基硅酯)氧基]甲基]-吡咯烷 943757-71-9
(R)-1-(3-Fluorophenyl)ethylaMine (R)-1-(3-氟苯基)乙胺 761390-58-3
(R)1-CyclopropylethylaMine (R)-1-環(huán)丙基乙胺 6240-96-6
英文名稱 中文名稱 CAS號(hào)
(1S,2S)-(+)-Pseudoephedrine hydrochloride 345-78-8
(1S,2S,3S,5S)-5-(2-AMino-6-(benzyloxy)-9H-purin-9-yl)-3-(benzyloxy)-2-(benzyloxyMethyl)cyclopentanol (interMediate step 3) (1S,2S,3S,5S)-5-(2-氨基-6-芐氧基-9H-嘌呤-9-基)-3-芐氧基-2-芐氧基甲基環(huán)戊醇 142217-77-4
(1S,2S,4R)-1,3,3-TRIMETHYL-BICYCLO[2.2.1]HEPTAN-2-OL 1,3,3-*基雙環(huán)[2.2.1]-庚-2-醇 512-13-0
(1s,3r)-Methyl 3-aMinocyclobutane carboxylate hydrochloride 74316-29-3
(1S,3S,7S,10R,11S,12S,16R)-3-[(1E)-2-[2-(AMinoMethyl)-4-thiazolyl]-1-Methylethenyl]-7,11-dihydroxy-8,8,10,12,16-pentaMethyl-4,17-dioxabicyclo[14.1.0]heptadecane-5,9-dione 21-氨基埃坡霉素 B 280578-49-6
(1S-cis)-Milnacipran Hydrochloride 175131-60-9
(2,3,5-trihydroxy-4-oxopentyl) dihydrogen phosphate 60802-29-1
(2,3-DICHLOROPHENYL) METHYL CYANOCARBONIMIDODITHIOATE 152382-15-5
(2,4-dihydroxy-5-isopropylphenyl)(5-((4-Methylpiperazin-1-yl)Methyl)isoindolin-2-yl)Methanone AT-13387 912999-49-6
(2,5-Dichlorophenyl) MethylcyanocarboniMidodithioate 152382-16-6
(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) N-Methyl-N-nitrosocarbaMate 80354-48-9
Dihydroactinidiolide 二氫獼猴桃內(nèi)酯 17092-92-1
(2,6-DICHLOROPHENYL) METHYL CYANOCARBONIMIDODITHIOATE 152382-18-8
(2,6-DIMETHYLPHENYL) METHYLCYANOCARBONIMIDODITHIOATE 152382-30-4
(2,6-DiMethyl-pyridin-4-yl)-Methanol 2,6-二甲基-3-羥甲基吡啶 18088-01-2
9,9-DioCtylfluorene-2,7-bis(boronic acid pinacol ester) 2,7-二(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧-2-硼烷基)-9,9-二辛基芴 196207-58-6
Lanosta-7,9(11),24-trien-26-oicacid, 3-oxo-, (24E)- GANODERIC ACID S 104759-35-5
(25R)-Spirosta-1,4-dien-3-one 2137-22-6
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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