Acc-2涎腺腺樣囊性癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)Acc-2涎腺腺樣囊性癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
(S)-(+)-(3,5-DIOXA-4-PHOSPHA-CYCLOHEPTA[2,1-A:3,4-A']DINAPHTHALEN-4-YL)BIS[(1R)-1-PHENYLETHYL]AMINE,DICHLOROMETHANE ADDUCT 3,4-A']二萘-4-基)二[1-苯基乙基]胺 415918-91-1
(S)-(+)-2-(AMINOMETHYL)PYRROLIDINE (S)-2-(氨甲基)吡咯烷 69500-64-7
(S)-(+)-2-METHYL-1-[(4-METHYL-5-ISOQUINOLYNYL)SULFONYL]HOMOPIPERAZINE 451462-58-1
(S)-(+)-2-Phenylbutyric acid S(+)-2-苯基丁酸 4286-15-1
S-(+)-3-Quinuclidinol (S)-(+)-3-喹寧醇 34583-34-1
(S)-(+)-5-(HydroxyMethyl)-2-pyrrolidinone p-toluenesulfonate (S)-(+)-5-羥甲基-2-吡咯烷酮對甲苯磺酸酯 51693-17-5
(3S,4S)-Pyrrolidine-3,4-diol hydrochloride (3S,4S)-吡咯烷-3,4-二醇鹽酸鹽 276862-76-1
(3S,6S)-2,7-DIMETHYL-3,6-OCTANEDIOL (3S,6S)-2,7-二甲基-3,6-辛二醇 129705-30-2
(3Z)-3-(ethoxy-hydroxy-Methylidene)-4-Methyl-pyridine-2,6-dione 569-51-0
(4-aMinophenyl)Methanesulfonic acid 6387-28-6
4-aMinophenyl)phosphonic acid 5337-17-7
(4aR,8aR)-rel-1,2,3,4,4a,5,8,8a-oCtahydronaphthalene (4AR,8AR)-REL-1,2,3,4,4A,5,8,8A-八氫萘 2001-50-5
CDDO-Me 2-氰基-3,12-二氧代齊墩果-1,9(11)-二烯-28-酸甲酯 218600-53-4
(4aα,7aα)-Octahydro-4β,7α-diMethylcyclopenta[c]pyran-3-one 485-43-8
(4-BOC-AMINOPHENYL)BORONIC ACID 4-(N-BOC-氨基)苯硼酸 380430-49-9
(4-BroMophenyl)(2-fluoro-4-hydroxyphenyl) Methanone (4-溴苯基)(2-氟-4-羥基苯基)甲酮 161581-99-3
(4-BroMopyridin-2-yl)Methyl acetate 4-溴吡啶-2-乙酸甲酯 192642-94-7
4-(2-oxopropyl)benzoic acid 4-(2-氧代丙基)苯甲酸 15482-54-9
(4-CHLORO-2-METHYLPHENYL) METHYL CYANOCARBONIMIDODITHIOATE 152382-25-7
(4-Chloro-3-Methylphenyl) MethylcyanocarboniMidodithioate 152382-26-8
nicotinaMide riboside *核糖 1341-23-7
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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