HO-8910卵巢癌細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)HO-8910卵巢癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
(4-chloropyridin-2-yl)MethanaMine 4-氯-2-吡啶甲胺 180748-30-5
(4-cyclopropylphenyl)Methanol 454678-87-6
(4-Fluorophenyl) Methyl cyanocarboniMidodithioate 152382-02-0
p-hydroxyphenyl acrylate 3233-36-1
(4-Methanesulfonyl-phenyl)-hydrazine hydrochloride 4-(甲基磺酰基)苯肼鹽酸鹽 17852-67-4
(4-METHOXYPYRIDIN-2-YL)METHANAMINE 4-甲氧基-2-甲氨基吡啶 194658-14-5
(4R)-4-Methyl-2-oxazolidinone 4042-43-7
2,2-DiMethyl-(4S)-1,3-dioxolane-4-acetaldehyde (S)-2-(2,2-DIMETHYL-1,3-DIOXOLAN-4-YL)ACETALDEHYDE 32233-44-6
1-Cyclohexene-1-carboxaldehyde,4-(b-D-glucopyranosyloxy)-2,6,6-triMethyl-,(4R)- 苦番紅花素 138-55-6
(4S)-4-[(4-Hydroxyphenyl)Methyl]-2,5-oxazolidinedione (4S)-4-[(4-羥基苯基)甲基]-2,5-惡唑烷二酮 3415/8/5
DPC-083 214287-99-7
(4-TERT-BUTYL-PHENYL)-PHENYL-AMINE 4-叔丁基-N-苯基苯胺 4496-49-5
(4-Vinylphenyl)Methanol (4-乙烯基苯基)甲醇 1074-61-9
3,6-dihydro-2H-pyran-5-ylMethanol 14774-35-7
(5'alpha)-2-broMo-12'-hydroxy-2'-(1-Methylethyl)-5'-(2-Methylpropyl)ergotaMan-3',6',18-trione 溴隱亭 25614-03-3
14-hydroxy codeinone 508-54-3
(5E)-2,6-DiMethyl-1,5,7-octatrien-3-ol 28977-58-4
(5-Methyl-2-oxo-1,3-dioxol-4-yl)Methyl 4-nitrophenyl carbonate (5-甲基-2-氧代-1,3-二氧雜環戊烯-4-基)甲基 4-硝基苯基碳酸酯 173604-87-0
(5-METHYL-PYRIDIN-2-YL)-HYDRAZINE 2-肼基-5-甲基吡啶 4931/1/5
(5R)-3-(4-broMo-3-fluorophenyl)-5-(hydroxyMethyl)-1,3-oxazolidin-2-one (5R)-3-(4-溴-3-氟苯基)-5-羥甲基惡唑烷-2-酮 444335-16-4
(5R)-6-Cyano-5-hydroxy-3-oxo-hexanoic Acid tert-Butyl Ester (5R)-6-氰基-5-羥基-3-氧代己酸叔丁基酯 125988-01-4
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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