ZR-75-30乳腺癌細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體ZR-75-30乳腺癌細(xì)胞):
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
1,10-decanediol 1,10-癸二醇 112-47-0
1- Ethyl 2,3 diMethyl iMidazoliuM tetrafluoroborate 1,2-二甲基-3-乙基咪唑四氟硼酸鹽 307492-75-7
1 FCL - 20'?- CALCIUM HYPOCHLORITE 65 % gran 次氯酸鈣 7778-54-3
Myo-Inositol Trispyrophosphate HexasodiuM Salt ITPP 23103-35-7
1 kg - 1.5kg 順* 96946-42-8
1 Methyl Napthalene 1-甲基萘 90-12-0
1-((S)-2-AMINO-PROPYL)-1H-INDAZOL-6-OL 210580-75-9
1-(1,3-BENZODIOXOL-5-YL)-2-BROMOETHAN-1-ONE 1-(1,3-苯并氧)2-溴乙酮 40288-65-1
1-(1-BROMONAPHTHALEN-4-YL)ETHANONE 1-(4-溴-1-萘基)乙酮 46258-62-2
1-(2,2-Difluoro-benzo[1,3]dioxol-5-yl)-cyclopropanecarboxylicacid 862574-88-7
TriMethylolpropane triglycidyl ether 2,2'-[[2-乙基-2-[(環(huán)氧乙基甲氧基)甲基]-1,3-聯(lián)丙基]雙(氧亞甲基)]雙環(huán)氧乙烷 3454-29-3
Ethanone,1-(2,4,6-triethylphenyl)- 3766-68-5
1-(2,6-Dichlorophenyl)-2-indolinone 1-(2,6-二)-2-吲哚啉酮 172371-96-9
1-(2,6-dichloropyridin-3-yl)ethanone 2,6-二氯-3-乙酰基吡啶 412018-50-9
1-(2,6-DIMETHOXYPHENYL)PIPERAZINE 1-(2,6-二甲氧基苯基)哌嗪 148583-59-9
1-(2-BROMOETHYL)-4-METHYL-PIPERAZINE 1-(2-溴乙基)-4-甲基哌嗪二氫溴酸鹽 801152-34-1
10 g 3524-28-5
1-(2-Chloroethoxy)-4-Nitrobenzene 2-氯乙基 4-硝基苯基醚 3383-72-0
1-(2-Deoxy-2-fluoro-β-D-arabinoFuranosyl)uracil 1-(2-脫氧-2-氟-beta-D-阿拉伯呋喃基)* 69123-94-0
1-(2-Hydroxyethyl)-4-Methylpiperazine 1-羥乙基-4-甲基哌嗪 5464-12-0
1-(2-Methoxyphenyl)-[1,4]diazepane 152943-97-0
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
暫無信息 |