TE-10食管癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)TE-10食管癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
1,2-BENZISOXAZOLE-5-SULFONYL CHLORIDE 16331-62-7
1,2-Bis(isocyanatoMethyl)benzene 鄰苯二甲基二異氰酸酯 25854-16-4
1,2-Phenylenebisphosphine 1,2-雙(膦酰)苯 80510-04-9
[2R-(2a,3b,11bb)]-1,3,4,6,7,11b-Hexahydro-9,10-diMethoxy-3-(2-Methylpropyl)-2H-benzo[a]quinolizin-2-ol [2R-(2a,3b,11bb)]-1,3,4,6,7,11b-六氫-9,10-二甲氧基-3-異丁基-2H-苯并[a]喹嗪-2-醇 85081-18-1
[3-[3,4-bis(carboxyMethyl) phenyl]-1-hydroxy-1-oxopropan -2-yl]azaniuMchloride 37169-56-5
[3aS-(3aa,4a,5b,6aa)]-4-[[[(tert-Butyl)diMethylsilyl]oxy]Methyl]-5-[(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy]hexahydro-2(1H)-pentalenone [3AS-(3AA,4A,5B,6AA)]-4-[[[(叔丁基)二甲基硅]氧]甲基]-5-[(四氫-2H-吡喃-2-基)氧基]六氫-2(1H)-二并環戊二烯酮 112168-22-6
[3-Chloro-2-Methylphenyl] MethylcyanocarboniMidodithioate 152382-29-1
[4-(2,2':6',2''-Terpyridin-4'-yl)phenyl]Methanol 447399-94-2
[4-CHLORO-2-(TRIFLUOROMETHYL)PHENYL] METHYL CYANOCARBONIMIDODITHIOATE 152382-23-5
[5-(TrifluoroMethyl)-2-Furyl]Methanol [5-(三氟甲基)-2-呋喃]甲醇 65865-28-3
[5-[[4-[2-(5-Ethyl-2-pyridinyl)ethoxy]phenyl]Methyl]-2,4-] thiazolidinedione hydrochloride 5-{4-[2-(5-乙基-2-吡啶)-乙氧基]-苯基}-2,4-噻唑烷二酮鹽酸鹽 112529-15-4
[5-[2-[(tert-butyl)aMino]-1-hydroxyethyl]-2-hydroxyphenyl]uroniuM chloride 34866-46-1
[C84] PCBM 3'-苯基-3'H-環丙并[18,37][5,6]富勒烯-C84-D2D-3'-丁酸甲酯 905843-95-0
[ethoxy(phenylMethylsulfanyl)phosphoryl]benzene 21722-85-0
[trans(trans)]-4'-propyl[1,1'-bicyclohexyl]-4-carbonitrile 65355-35-3
6-BROMO ACETYL-2-DIMETHYLAMINONAPHTHALENE 6-溴乙酰基-2-二甲氨基萘 210832-86-3
2-Propanone,1,1,3,3-tetrafluoro- 360-52-1
0.5g 65332-44-7
2c-e 2-(4-乙基-2,5-二甲氧基苯基)乙胺 71539-34-9
100g 1,3-BIS(TERT-BUTOXYCARBONYL)GUANIDINE 154476-57-0
1 3-DI-BOC-2-(2-HYDROXYETHYL)GUANIDINE 1,3-DI-BOC-2-(2-HYDROXYETHYL)GUANIDINE 215050-11-6
1 4 7 10-TETRATHIACYCLODODECANE 四硫環十二烷 25423-56-7
1 and 10 g 155242-98-1
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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