SGC-7901胃腺癌細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)SGC-7901胃腺癌細(xì)胞 :
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。 加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
1,10-PHENANTHROLINE-2,9-DICARBOXYLIC ACID 1,10-鄰二氮雜菲-2,9-二甲酸 57709-61-2
1,10-Phenanthroline-5-carboxylic acid 1,10-菲咯林-5-甲酸 630067-06-0
1,10-PHENANTHROLINIUM CHLORIDE MONOHYDRATE 氯化-1,10-菲咯啉水合物 18851-33-7
1,12-Bis[4-Methyl-5-(2-hydroxyethyl)thiazol-3-iuM-3-yl]dodecane dibroMide 1,12-雙[4-甲基-5-(2-羥基乙基)噻唑-3-基]十二烷二溴化物 321915-72-4
1,12-Dichlorododecane 1,12-二氯十二烷 3922-28-9
1,12-dodecanedithiol 33528-63-1
1,13-DibroMotridecane 1,13-二溴十三烷醇 31772-05-1
1,14-DibroMo-3,6,9,12-tetraoxatetradecane 1,14-二溴-3,6,9,12-四惡十四烷 57602-02-5
1,14-DIBROMOTETRADECANE 1,14-二溴十四烷 37688-96-3
1,15-DibroMopentadecane 1,15-二溴十五烷 81726-81-0
1,18-octadecanediol 1,18-十八烷二醇 3155-43-9
4,4'-cyclohexylidenedianiline 1,1-二(4-氨基苯基)環(huán)己烷 3282-99-3
1,1-bis(4-fluorophenyl)-2-(1h-1,2,4-triazol-1-yl)ethanol 76674-14-1
DI(1H-IMIDAZOL-1-YL)METHANIMINE 二(1氫-咪唑基)亞胺 104619-51-4
1,1'-CarbonyldiiMidazole N,N'-羰基二咪唑 530-62-1
1,1-Cyclobutanediethanol 877125-96-7
1,1-Cyclopropanedicarboxylic acid Monoethyl ester 1,1-環(huán)丙烷二羧酸乙酯 13279-88-4
1,1-cyclopropanediethanol 80438-88-6
1,1-DiaMinoferrocene 1,1'-二氨基二茂鐵 41636-79-7
1,1-DICHLOROSILACYCLOBUTANE 1,1-二氯硅基環(huán)丁烷 2351-33-9
1,1-DIETHOXY-2-ISOCYANOETHANE 2,2-二乙氧基-1-異氰基乙烷 15586-32-0
1,1-Diethoxybutane 丁醛二乙縮醛 3658-95-5
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過(guò)1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過(guò)夜。第二天放入液氮中。
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