HGC-27胃癌細(xì)胞未分化上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)HGC-27胃癌細(xì)胞未分化:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
1-[4-(BROMOMETHYL)PHENYL]-1H-PYRAZOLE 1-ó4-(溴甲基)苯-1H-吡唑 368869-85-6
1-[4-AMino-7-(3-hydroxypropyl)-5-(4-Methylphenyl)-7H-pyrrolo[2,3-d]pyriMidin-6-yl]-2-chloro-ethanone 821794-90-5
10 -100 g 涕滅威(鐵滅克) 116-06-3
10 g 164112-72-5
10 g 阿瓦斯丁 216974-75-3
DIALLYL CHLOROPHOSPHATE 16383-57-6
10 GM and 25 GM 松蘿酸 125-46-2
10 GM and 25 GM 131436-22-1
FosMidoMycin 膦胺霉素 66508-53-0
TREMULACIN 29836-40-6
10-(T-BOC-AMINO)-1-DECYLBROMIDE 887353-29-9
10,10'-DibroMo-9,9'-bianthryl 10,10'-二溴-9,9'-聯(lián)二蒽 121848-75-7
10,10-DiMethylanthrone 10,10-二甲基蒽酮 5447-86-9
10,11-DIHYDRO-5H-BENZO[E]PYRROLO[1,2-A][1,4]DIAZEPINE 10,11-二氫-5H-吡咯并[2,1-C][1,4]苯并二氮雜環(huán)庚烷 22162-53-4
100 graM 3-(2-)吡咯烷 885277-67-8
PIGMENT RED 83 顏料紅 83 [CI 58000] 104074-25-1
Lineatin (+/-)-3,3,7-*基-2,9-二氧雜三環(huán)[3.3.1.04,7]壬烷 65035-34-9
2-[(triMethoxysilyl)Methyl]butane-1,4-diaMine 6037-49-6
100Mg 125229-62-1
100Mg p-壬基苯胺 37529-29-6
10-25Mg 5302-45-4
3-HYDROXYOCTADECANOIC ACID 3-羥基十八烷酸 45261-96-9
106120-04-1 106120-04-1
10-Deacetylbaccatin III 10-脫乙酰基巴卡丁 III 32981-86-5
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過(guò)1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過(guò)夜。第二天放入液氮中。
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