SPC-A-1肺腺癌細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)SPC-A-1肺腺癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
1-aMinopyrrolidin-2-one, hydrochloride 1-氨基吡咯烷-2-酮鹽酸鹽 20386-22-5
1-Azabicyclo[2.2.2]octan-3-aMine,Monohydrochloride, (3S)- (9CI); 137661-30-4
1-Azabicyclo2.2.2octan-4-ol 26458-74-2
1-Azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylicacid,7-oxo-,(2S,5R)-(9CI) 112419-10-0
1-Azetidinecarboxylic acid, 3-(carboxyMethoxy)-, 1-(1,1-diMethylethyl) 3-(羧基甲氧基)-1-氮雜環(huán)丁烷羧酸叔丁酯 889952-83-4
1-AZIDO-3,6,9-TRIOXAUNDECANE-11-OL 86770-67-4
1,8-dihydroxy-4,5- bis(MethylaMino)anthraquinone 56524-76-6
1,8-DIHYDROXYNAPHTHALENE 1,8-二羥基萘 569-42-6
1,8-Naphthalenediboronic acid 947617-22-3
1,8-Naphthosultone 1,8-萘磺酸內(nèi)酯 83-31-8
1,8-Naphthyridin-2-butyric acid 886362-95-4
1,9-DICHLORONONANE 1,9-二氯壬烷 821-99-8
1,9-HEPTADECADIENE-4,6-DIYNE-3,8-DIOL 福爾卡烯炔二醇 55297-87-5
1.0Kg 3-氯-2-氯甲基丙烯 1871-57-4
1-[(2-[DIETHYLAMINO]ETHYL)AMINO]-4-[HYDROXYMETHYL]-9H-THIOXANTHEN-9-ONE 海恩酮 3105-97-3
1-[(2S)-Tetrahydro-2-furanyl]ethanone 1-[(2S)-四氫-2-呋喃基]乙酮 131328-27-3
1-[(4-chloro-2-nitrophenyl)azo]-2-naphthol 6410-13-5
1-[(Benzyloxy)carbonyl]-3-piperidinecarboxylic acid (R)-N-Cbz-3-哌啶甲酸 78190-11-1
1-[(Benzyloxy)carbonyl]piperidine-4-carboxylic acid N-Cbz-哌啶-4-羧酸 10314-98-4
1-[(Methylthio)Methyl]ethyl acetate 74586-09-7
1-[[4-(3-Methoxypropoxy)-3-Methyl-2-pyridinyl]Methyl]-2-[[[4-(3-Methoxypropoxy)-3-Methyl-2-pyridinyl]Methyl]sulfinyl]-1H-benziMidazole 2-{[4-(3-甲氧基丙氧基)-3-甲基吡啶-2-基]甲亞磺酰基}-1-[4-(3-甲氧基丙氧基)-3-甲基吡啶-2-基]甲基苯并咪唑 935260-92-7
Ethanone, 1-[4-(aMinoMethyl)phenyl]- (9CI) 1-[4-(氨基甲基)苯基]-乙酮 87171-25-3
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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