Caco-2結腸腺癌細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)Caco-2結腸腺癌細胞 :
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。 加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
2-Acetyl-3-phenylacrylic acid ethyl ester 2-苯亞甲基乙酰乙酸乙酯 620-80-4
2-acetyl-4-broMothiophene 1-(4-溴-2-噻吩)乙酮 7209/11/2
2-AcetylaMino-5-Mercapto-1,3,4-thiadiazole 2-乙酰氨基-5-巰基-1,3,4-噻二唑 32873-56-6
2,2'-[(4-fluoro-3-nitrophenyl)iMino]bisethanol 2,2'-[(4-氟-3-硝基苯基)亞氨基]雙乙醇 29705-38-2
2,2'-[[(5-Methyl-1H-benzotriazol-1-yl)Methyl]iMino]bisethanol N-[(5-甲基-1H-苯并三唑-1-基)甲基]二乙醇胺 80584-88-9
2',3'-Dideoxyguanosine 2',3'-二脫氧鳥苷 85326-06-3
diethyl 2,3-diethyl-2-butenedioate 54369-24-3
2,3-DIFLUORO-4-BROMONITROBENZENE 2,3-二氟-4-溴硝基苯 1003708-24-4
2,3-DIHYDRO-1,1-DIOXO-1,2-BENZISOTHIAZOLE 936-16-3
2,3-Dihydro-1H-isoindole-1-carboxylic acid 2,3-二氫-1H-異吲哚-1-羧酸 66938-02-1
2,3-DIHYDRO-1H-PYRROLO[3,4-C]PYRIDINE 2,3-二氫-1H-吡咯[3,4-C]吡啶 496-13-9
2-PHENYL-2,3-DIHYDRO-4-QUINOLONE 2,3-二氫-2-苯基-4(1H)-喹啉 16619-14-0
DDMP 28564-83-2
2,3-dihydropyridine-2,6-dicarboxylic acid 16052-12-3
2,3-Dihydroxybenzoic acid 2,3-二羥基苯甲酸 303-38-8
2,3-DIHYDROXY-BENZOIC ACID ETHYL ESTER 2,3-二羥基苯甲酸乙酯 3943-73-5
2,3-dihydroxypropyl tridecanoate 67701-27-3
2,3-Diketo-L-gulonic acid 2,3-二酮-L-古洛糖酸 3445-22-5
2,3-diMethyl-2,5-cyclohexadiene-1,4 dione 2,3-二甲基-1,4-苯醌 526-86-3
2,3-DiMethylbenzyl alcohol 2,3-二甲基芐醇 13651-14-4
2,3-diMethylthiophene 2,3-二甲基噻吩 632-16-6
2,3-dinitrobenzoic acid 2,3-二硝基苯甲酸 15147-64-5
2,3-O-Isopropylidene-D-ribofuranose 2,3-異亞丙氧基-D-呋喃核糖苷 4099-88-1
2,3-O-ISOPROPYLIDENE-L-LYXO,4-LACTONE 2,3-O-異丙亞基-L-來蘇糖酸-1,4-內酯 152006-17-2
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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