SHG-44膠質(zhì)瘤細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)SHG-44膠質(zhì)瘤細(xì)胞:
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
2,2'-[Methylenebis(oxy)]bisethanol 2565-36-8
2,2'-[oxybis(ethyleneoxy)]bisacetyl dichloride 31255-25-1
2,2'-Azobis(4-Methoxy-2,4-diMethylvaleronitrile) 2,2'-偶氮雙(4-甲氧-2,4-二甲基戊腈) 15545-97-8
2,2'-Azodi(2-Methylbutyronitrile) 。 偶氮二異戊腈 13472-08-7
PRODIGIOSIN 82-89-3
2,3,4,6-tetra-O-benzyl-D-galactopyranose 2,3,4,6-四-O-芐基-D-吡喃半乳糖 53081-25-7
2,3,4-TribroMostyrene 30157-74-5
2,3,4-trichlorobenzoic acid 2,3,4-三氯苯甲酸 50-75-9
2,3,5,6-Pyrazinetetracarbonitrile 33420-37-0
2,3,5,6-TetrabroMo-4-Methyl-4-nitro-2,5-cyclohexadien-1-one 2,3,5,6-四溴-4-甲基-4-硝基-2,5-環(huán)己二烯-1-酮 95111-49-2
2,3,5,6-Tetrachloro-p-xylene 877-10-1
2,3,5,7A-TETRAHYDRO-1H-PYRROLIZINE 51463-41-3
2,3,5,-Tri-O-benzyl-1-O-(4-nitrobenzoyl)-D-Arabinofuranose 1-對硝基苯甲酸-2,3,5-三芐氧基-D-阿拉伯呋喃糖甙 52522-49-3
2',3',5'-Tri-O-acetyl-2N,2N-diMethyl-guanosine 73196-87-9
2',3',5'-Tri-O-acetyl-D-adenosine 2',3',5'-三乙酰腺苷 7387-57-7
2,3,6,7-TETRAHYDROBENZO[1,2-B:4,5-B']DIFURAN 81926-24-1
Naphthalene,2,3,6,7-tetraMethyl- 2,3,6,7-四甲基萘 1134-40-3
2,3,6-trinitrophenol 2,3,6-三硝基* 603-10-1
2,3-DiaMinobenzotrifluoride 2,3-二氨基三氟甲苯 360-60-1
2,3-dibroMo-9,10-anthracenedione 2,3-二溴-9,10-蒽二酮 633-68-1
2,3-dibroMonaphthalene 2,3-二溴萘 13214-70-5
2,3-Dichloro-5-(chloroMethyl)pyridine 2,3-DICHLORO-5-(CHLOROMETHYL)PYRIDINE 54127-31-0
2,3-Dichloro-5,6-dicya,4-benzoquinone 2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌 84-58-2
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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