A-375 [A375]惡性黑色素瘤細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清，ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清，優(yōu)等胎牛血清，標準胎牛血清，gibco特優(yōu)級胎牛血清血清，新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標記抗體（FITC標記抗體）A-375 [A375]惡性黑色素瘤細胞：
（1） 收集1×106個細胞，800rpm離心5min，4℃以上冷PBS洗一次。
（2） 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞，800rpm離A-375 [A375]惡性黑色素瘤細胞心5min。
（3） 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞，冰上孵育10min，800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體（5×105個細胞/20ul抗體）的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定，待測即可。
（4） 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法：
（1）收集2×106個細胞，用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次，800rpm離心5min。
（2）用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min；2ml PBS重懸細胞，800rpm離心5min；
（3）用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞，冰上放置10min,800rpm離心5min。
（4）加入飽和劑量未標記抗體，冰上放置40min,800rpm離心5min，用2ml冷的PBS 重懸細胞，800rpm離心5min，洗去未結(jié)合一抗，重復(fù)一次。
（5）加入熒光標記（FITC）標記的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm離心5min，去上清，PBS洗滌兩次。
（6）加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞；固定待測。
（7）流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備：
（1）待測樣本制成單細胞懸液，然后200g離心5分鐘，棄上清。
（2）用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定，4℃保存 ，至少固定18小時。
（3）調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升，取1毫升細胞懸液，用PBS洗三次，細胞重懸于1毫升PI染液中，37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
（4）PI染液終濃度為50微克/毫升，RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品：
2,6-BIS（BROMOMETHYL）FLUOROBENZENE  25006-86-4
2,6-Bis（trifluoroMethyl）aniline 2,6-雙三氟甲基苯胺 313-13-3
2,6-bis（trifluoroMethyl）pyriMidin-4-aMine  717-61-3
2,6-DIAMINO-3-NITROSOPYRIDINE 2,6-二氨基-3-亞硝基嘧啶 89323-10-4
2,6-DiaMino-4,5,6,7-tetrahydrobenzothiazole 2,6-二氨基-4,5,6,7-四氫苯并噻唑 104617-49-4
2,6-diaMino-5-nitropyriMidin-4（3h）-one 2,4-二氨在-6-羥基-5-硝基嘧啶 3346-23-4
2,6-DibroMo-4,4-bis（2-ethylhexyl）-4H-cyclopenta[2,1-b:3,4-b 2,6-二溴-4,4-雙（2-乙基己基）-4H-環(huán)戊并[2,1-B:3,4-B']二噻吩 365547-21-3
2,6-DibroMo-4,8-bis[（2-ethylhexyl）oxy]-benzo[1,2-b:4,5-b']dithiophene 2,6-二溴-4,8-雙[（2-乙基己基）氧基]-苯并[1,2-B:4,5-B']二噻吩 1226782-13-3
2,6-DibroMoanthracene 2,6-二溴蒽 186517-01-1
2,6-DIBROMOBENZALDEHYDE 2,6-二溴苯甲醛 67713-23-9
2,6-DIBROMOBENZOIC ACID 2,6-二溴苯甲酸 601-84-3
2,6-DibroModithieno[3,2-b:2′,3′-d]thiophene 2,5-二溴二噻吩并[3,2-B:2',3'-D]噻吩 67061-69-2
2,6-DibroMonaphthalene 2,6-二溴萘 13720-06-4
2,6-DibroMopurine 2,6-二溴嘌呤 1196-41-4
2,6-DIBROMOQUINONE-4-CHLOROIMIDE 2，6-二溴喹柄-4-氯亞胺 537-45-1
2,6-DibroMotoluene 2,6-二溴甲苯 69321-60-4
2,6-DICHLORO-3-NITROBENZOIC ACID 2 6-二氯-3-硝基苯甲酸 55775-97-8
2,6-Dichloro-4,8-dipiperidinopyriMidino[5,4-d]pyriMidine 2,6-二氯-4,8-二哌啶子基嘧啶并[5,4-D]嘧啶 7139/2/8
2,6-Dichloro-4-Methyl-3-pyridinecarboxylic acid 2,4-二氯-4-甲基-3-吡啶甲腈 62774-90-7
2,6-Dichloro-4-nitropyridine 2,6-二氯-4-硝基吡啶 25194-01-8
細胞凍存
１．將細胞消化下來，移入離心管離心，棄上清
２．準備凍存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培養(yǎng)基＋１０％ＤＭＳＯ（現(xiàn)用現(xiàn)配）
３．加１．５凍存液在離心管中，將細胞吹打均勻，移入凍存管內(nèi)．
放入－２０度冰箱２－４小時后．再放入－８０度冰箱過夜，第二天放入液氮罐保存
原則　　慢凍速溶
４．加１．５凍存液在離心管中，將細胞吹打均勻，移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。