CW-2結腸腺癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)CW-2結腸腺癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
2,5,8,11,14,17,20,23-octaoxatetracosane 1191-91-9
2,5-diaMinobenzoic acid 2,5-二氨基苯甲酸 610-74-2
2,5-DiaMinophenol 636-25-9
2,5-DIAZABICYCLO[2.2.1]HEPTANE, 2-METHYL- 2-甲基-2,5-二氮雜二環[2.2.1]庚烷 59436-77-0
2,5-DibroMonitrobenzene 2,5-二溴硝基苯 3460-18-2
2,5-Dichloropyrazine 2,5-二氯吡嗪 19745-07-4
5-10g 2,5-二氟-4-甲基苯甲酸 103877-80-1
2,5-DiMethoxy-4-(ethylthio)phenethylaMine 2,5-二甲氧基-4-乙硫基* 207740-24-7
2,5-DiMethoxy-4-chlorophenylethylaMine 2,5-二甲氧基-4-氯* 88441-14-9
4-IODO-2,5-DIMETHOXYPHENETHYLAMINE 2,5-二甲氧基-4-碘*(2C-I) 69587-11-7
2,5-DIMETHOXY-4-METHYLPHENYLETHYLAMIN 2,5-二甲氧基-4-甲基* 24333-19-5
2,5-DiMethoxy-4-propylthiophenethylaMine 2,5-二甲氧基-4-正丙硫基* 207740-26-9
2,5-DiMethyl CyclopentanaMine 80874-82-4
2,5-DiMethylbenzylaMine 2,5-二甲基芐胺 93-48-1
2,5-DIMETHYLTEREPHTHALIC ACID 2,5-二甲基-1,4-苯二甲酸 6051-66-7
2,5-diMethylthiophene 2,5-二甲基噻吩 638-02-8
2,5-di-tert-Butylphenol 2,5-二叔丁基酚 5875-45-6
2,5-NORBORNADIENE 二環庚二烯 121-46-0
2,5-Oxazolidinedione,4-(phenylMethyl)-, (4S)- (S)-(-)-4-芐基氧氮雜環戊烷-2,5-二酮 14825-82-2
2,5-Pyrrolidinedicarboxylicacid, 1-(phenylMethyl)-, hydrochloride 1-芐基-2,5-吡咯烷二甲酸鹽酸鹽 325146-20-1
N-succiniMidyl propionate 30364-55-7
2,6,a,a-tetrachlorotoluene 2,6-二氯芐叉二氯 81-19-6
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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