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熒光-PCR法

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-08-09 11:02:21瀏覽次數(shù):1164次

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熒光-PCR法注意事項(xiàng):.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

性能指標(biāo):點(diǎn)擊了解更多熒光-PCR法
.試劑盒檢測特異性為00%
2. 檢測試劑盒重現(xiàn)性為00%
3. 靈敏度可達(dá)到03/ml
4. 有效期為6個月產(chǎn)品名稱:熒光-PCR法
規(guī)格:48T/盒
類別:熒光-PCR法
運(yùn)輸:低溫、避光、快遞免費(fèi)送貨上門。
用途:生化實(shí)驗(yàn),合成實(shí)驗(yàn)等試驗(yàn)。
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個月。
自備試劑:樣品 RNA。

 

使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應(yīng)合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應(yīng),然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 5-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至0kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.~umol或0~00pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
2-基-3-硝苯甲酯 59382-59- 400µL Bovine Serum Albumin, Acetylated -20℃保存

三基膦 594-09-2 00µg Vitronectin -20℃保存

3-氯-2-硝苯胺 59483-54-4 5mg Thioredoxin -20℃保存

DL-蛋氨 59-5-8 mg Streptavidin -20℃保存

-基吡唑-4-甲 5952-92- 0.mL Streptavidin,HRP conjugated 頻繁使用時(shí)放4℃,不用時(shí)放-20℃

二基丙二 595-46-0 0.5mL Streptavidin,AP Conjugated 4℃保存,請勿冷凍

4-溴-2-甲氧苯胺 59557-9-4 0mg Avidin -20℃保存

3-氨基-2-萘甲 5959-52-4 2mg HRP-Avidin -20℃保存

2,2-二基-3-羥基丙 597-3-9 00mg AP-Avidin -20℃保存

2,2-二基丁二 597-43-3 5mg FITC-Avidin -20℃保存

2-甲乙酯苯胺 59777-72-9 mg R-Phycoerythrin Avidin -20℃保存

2,5-二氯煙 59782-85-3 0mg Nuetral Avidin -20℃保存

代嗎啉 ,-二氧化物鹽鹽 5980-62-6 g Biotin -20℃保存

,-環(huán)丙基二羧 598-0-7 5mg FITC-Biotin -20℃保存

溴丙 598-3-2 25mg Biotin-BSA -20℃保存
熒光-PCR法LM-37瓊脂  規(guī)格: ml  Monkey apoprotein A,apo-A

改良緩沖蛋白胨水  規(guī)格: 0.2ml  Monkey apoprotein B00,apo-B00

枸櫞鹽培養(yǎng)基  規(guī)格: 0.2ml  Monkey Macrophage Migration Inhibitory Factor,MIF

Christensen尿素瓊脂  規(guī)格: 0.ml  Peanut agglutinin,PNA

尿素酶瓊脂基礎(chǔ)  規(guī)格: 0.2ml  Sophora japonica agglutinin,SJA

MR-VP培養(yǎng)基  規(guī)格: 0.2ml  Aflatoxin,AFT

緩沖葡萄糖蛋白胨水  規(guī)格: 0.ml  Chicken ,3-βD glucosidase,,3-βD-Glu  

V-P半固體瓊脂  規(guī)格: 0.ml  Hydroxycorticosteroids,7-OHCS  

胰蛋白胨水  規(guī)格: 0.ml  Chicken 7-ketosteroids,7-KS  

明膠培養(yǎng)基  規(guī)格: 0.ml  Chicken 5-Nucleotidase,5-NT  

鹽胨水培養(yǎng)基  規(guī)格: 0.2ml  Chicken factor B,BF  

靛基質(zhì)試驗(yàn)培養(yǎng)基  規(guī)格: 0.2ml  Chicken C-Reactive Protein,CRP  

吲哚培養(yǎng)基  規(guī)格: 0.ml  Chicken L-Phenylalanine ammonla-lyase,PAL  

丙二培養(yǎng)基  規(guī)格: 0.ml  Chicken N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG  

馬尿培養(yǎng)基  規(guī)格: 0.ml  Chicken Interferon α,IFN-α
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

 

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