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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>PCR檢測(cè)試劑盒>>熒光-PCR法>> 大豆內(nèi)源基因Lectin核酸檢測(cè)試劑盒供應(yīng)商
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產(chǎn)品型號(hào)
品 牌
廠商性質(zhì)代理商
所 在 地上海市
更新時(shí)間:2019-04-17 13:02:05瀏覽次數(shù):3652次
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大豆內(nèi)源基因Lectin核酸檢測(cè)試劑盒供應(yīng)商
產(chǎn)品名稱:大豆內(nèi)源基因Lectin核酸檢測(cè)試劑盒供應(yīng)商
規(guī)格:48T/盒
類(lèi)別:熒光-PCR法
運(yùn)輸:低溫、避光、快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。
用途:生化實(shí)驗(yàn),合成實(shí)驗(yàn)等試驗(yàn)。
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個(gè)月。
自備試劑:樣品 RNA。?
性能指標(biāo):點(diǎn)擊了解更多熒光-PCR法。
.試劑盒檢測(cè)特異性為00%
2. 檢測(cè)試劑盒重現(xiàn)性為00%
3. 靈敏度可達(dá)到03/ml
4. 有效期為6個(gè)月
?
使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應(yīng)合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應(yīng),然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 5-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至0kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.~umol或0~00pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
?對(duì)氟苯 250mL Veronal Buffered Saline with Mg++ and EGTA (VBSMG) 常溫保存
2-吡基乙醇 500mL Wash Buffer 常溫保存
4-乙炔基啶鹽鹽 500mL Wash Buffer,pH8.0 常溫保存
4-三氟甲氧氟苯 250mL Yeast Lysis Buffer (for large scale prep) 常溫保存
D-氨基丙醇 250mL Yeast Lysis Buffer (for mini prep) 常溫保存
DL-2-硝基丙氨 250mL Yeast Lysis Solution for DNA Isolation 常溫保存
2-基丙烷酰 50mL Zinc Acetate Solution,00mM 常溫保存
2,2,2-三氟乙胺 50mL Zinc Chloride Solution,25mM 常溫保存
對(duì)氨苯乙 50mL Zinc Sulfate Solution,00mM 常溫保存
5-溴煙 250mL Zinc-Fixative 常溫保存
N-芴甲氧羰基-L-丙氨 250mL Zinc-Formalin 常溫保存
Fmoc-L-丙氨 500mL Zymogram Developing Buffer,0X 常溫保存
Fmoc-L-亮氨 500mL Zymogram Renaturation Buffer,0X 常溫保存
N-alpha-芐氧羰基-L-2,3-二氨基丙 25mL Zymogramm Sample Buffer 常溫保存
2-基噻唑 50T H5N Bird Flu Realtime PCR Kit 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
大豆內(nèi)源基因Lectin核酸檢測(cè)試劑盒供應(yīng)商2,3-dinor thromboxane B2,2,3-dinor-TXB2 人2,3Dinor血栓烷B2 CAS: 03577-40-8 規(guī)格: ea
-dehydro-thromboxane B2,-DH-TXB2 人去氫血栓烷B2 CAS: 43-07-7 規(guī)格: 500mg
thrombomodulin,TM 人血栓調(diào)節(jié)蛋白 CAS: 規(guī)格: 500mg
Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI 人纖溶抑制因子/激活的纖溶抑制物 CAS: 75706-2-6 規(guī)格: 200mg
platelet membrane glycoprotein II b III a,GP- II b III a 人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa CAS: 2809-5-5 規(guī)格: 200mg
thrombospondin ,TSP- 人血小板反應(yīng)蛋白/敏感蛋白 CAS: 2809-52-6 規(guī)格: 25mg
alpha-granular membrane protein,GMP-40 人血漿α顆粒膜蛋白 CAS: 6-90-5 規(guī)格: 200mg
terminal complement complex C5b-9,TCC C5b-9 人末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9 CAS: 455-4- 規(guī)格: 50mg
Complement 4,C4 人補(bǔ)體蛋白4 CAS: 08605-62-5 規(guī)格: 0mg
Complement 3,C3 人補(bǔ)體蛋白3 CAS: 6643-23-0 規(guī)格: 0mg
coagulation factor II ,F II 人Ⅱ CAS: 492-8-8 規(guī)格: 500mg
leucocyte antigen B27,HLA-B27 人類(lèi)白細(xì)胞抗原B27 CAS: 7438-53-6 規(guī)格: 200mg
Haptoglobin,Hpt/HP 人結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白 CAS: 50293-90-8 規(guī)格: 200mg
50% complement hemolysis,CH50 人血清總補(bǔ)體 CAS: 規(guī)格: 30mg
Complement fragment 4a,C4a 人過(guò)敏毒素/補(bǔ)體片斷4 CAS: 890-68-4 規(guī)格: 20mg
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