在 1 × TBE 中分別用 GelRed 和 EB 預(yù)制 1% 瓊脂糖凝膠中 1Kb Plus DNA Ladder 稀釋物的電泳圖。從左至右各泳道 DNA 總量分別為 : 200 ng , 100 ng , 50 ng and 25 ng 。凝膠用 300nm 透視器顯像,用 EB 濾光片和 Polaroid 667 黑白膠片拍照
Table A. 訂貨信息
Cat# | Product Name | Unit Size | 品 牌 |
41001 | GelRedTM?Nucleic Acid Gel Stain, 3X in water | 4.0 L | Biotium |
41002 | GelRedTM?Nucleic Acid Gel Stain, 10,000X in DMSO | 0.5 mL | Biotium |
41003 | GelRedTM?Nucleic Acid Gel Stain, 10,000X in water | 0.5 mL | Biotium |
41003-1 | GelRedTM?10,000X solution in water, bulk pack | 10 mL | Biotium |
41004 | GelGreenTM?Nucleic Acid Gel Stain, 10,000X in DMSO | 0.5 mL | Biotium |
41005 | GelGreenTM?Nucleic Acid Gel Stain, 10,000X in water | 0.5mL | Biotium |
由美國(guó)BIOTIUM公司技術(shù)專(zhuān)家研發(fā)南京森貝伽提供的代理GelGreen核酸凝膠染料是兩種集高靈敏、低毒性和超穩(wěn)定于一身的的熒光核酸凝膠染色試劑。其水溶染色劑通過(guò)美國(guó)*安全認(rèn)定,廢棄物可直接倒入下水道,而不會(huì)造成任何環(huán)境污染。(下載美國(guó)Litron Laboratories, Inc. 完整安全檢測(cè)報(bào)告)
目前大多數(shù)商業(yè)化的核酸染料(凝膠染色試劑)總是在安全性、穩(wěn)定性和靈敏性等方面不*令人滿(mǎn)意。例如,雖然 EB (溴化乙啶)作為目前使用zui廣泛的核酸凝膠染色試劑,能夠在多數(shù)應(yīng)用中提供可以接受的靈敏度,但它是一種高誘變性的化學(xué)物質(zhì)。而且EB染色后具有較高的背景熒光信號(hào)(如圖1)。代理GelGreen核酸凝膠染料也被廠(chǎng)家宣傳為zui靈敏的凝膠染色試劑。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微堿性電泳緩沖溶液或預(yù)制凝膠中會(huì)快速降解,穩(wěn)定性差導(dǎo)致染色效果極不可靠。 SYBR safe 被認(rèn)為是市場(chǎng)上較為安全的核酸染料 ,但它的染色效果還遠(yuǎn)不及 SYBR Green I 。
Biotium公司的無(wú)論用于預(yù)制凝膠染色還是凝膠電泳后染色,都表現(xiàn)出了*的靈敏度。為配合 312 nm UV 凝膠成像系統(tǒng)而設(shè)計(jì)的 GelRed ,在使用了我們新開(kāi)發(fā)的具有的試驗(yàn)步驟后(該試驗(yàn)步驟中使用稀釋的 NaCl 溶液替代傳統(tǒng)的 TBE 緩沖溶液),在凝膠電泳后染色中優(yōu)于或者至少相當(dāng)于 SYBR Gold 。但與 SYBR Gold 不同, GelRed 在預(yù)制凝膠中使用時(shí)仍然有*的靈敏度,事實(shí)上GelRed 在檢測(cè)低濃度、微量 DNA 方面比 EB 表現(xiàn)出更高的靈敏度,尤其對(duì)小分子量的 DNA 檢測(cè)非常靈敏(圖1)。 GelGreen 可以滿(mǎn)足使用 488 nm 激光凝膠掃描儀或者可見(jiàn)光激發(fā)的 Dark Reader 的研究人員的使用要求。 GelGreen 無(wú)論是在預(yù)制凝膠還是凝膠電泳后染色中都與 SYBR Green I 靈敏度相當(dāng),但不存在后者的不穩(wěn)定性問(wèn)題。實(shí)際上, GelRed 和 GelGreen ,特別是 GelRed 非常穩(wěn)定,可以*在室溫下保存。當(dāng)這兩種染料稀釋在 TBE 或者類(lèi)似的電泳緩沖溶液中時(shí)甚至可以使用微波爐加熱,便于采用常規(guī)方法制備預(yù)制凝膠。含有染料的預(yù)制凝膠可以成批制備,*保存。
同樣重要的是, GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green I 提高了安全性。 獨(dú)立的測(cè)試服務(wù)公司( Litron Laboratories, Inc. )進(jìn)行的標(biāo)準(zhǔn)艾姆斯氏測(cè)試結(jié)果表明, 在 18.5 μ g /mL (該濃度遠(yuǎn)高于*用于電泳后染色的 約 4 μ g/mL 的 3X 染色液 )濃度下, GelGreen 沒(méi)有誘變性,而 GelRed 也僅在 S9 代謝活化時(shí)有微弱的誘變性。 GelRed 和 GelGreen 的特殊化學(xué)結(jié)構(gòu)使其難以穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞,正是這一特性降低了染料的細(xì)胞毒性。如圖3。相反, SYBR Green I 廣泛地用于活細(xì)胞線(xiàn)粒體和核 DNA 染色,這正是由于它能快速的被細(xì)胞吞入。由于已知 SYBR Green I 對(duì)紫外線(xiàn)導(dǎo)致的突變有強(qiáng)烈的增強(qiáng)作用( Ohta et al. Mutat. Res. 492 , 91(2001) ),因此它的高細(xì)胞膜透性使它在紫外環(huán)境觀(guān)察時(shí)成為凝膠染色的主要有害物質(zhì)。
特性:
gelred 高靈敏度
是目前市場(chǎng)中zui靈敏的凝膠核酸染料
gelred 穩(wěn)定性*
可以使用微波爐加熱,可以在室溫下保存
gelred 更安全
艾姆斯氏試驗(yàn)結(jié)果表明,該染料的誘變性遠(yuǎn)小于 溴化乙錠 ( EB )
gelred 廣泛的適應(yīng)性
適用于預(yù)制凝膠和凝膠電泳后染色
gelred 染色過(guò)程簡(jiǎn)單
與 EB 一樣,在預(yù)制膠和電泳過(guò)程中不必?fù)?dān)心染料降解;而電泳后染色過(guò)程也只需 30 分鐘且無(wú)需脫色或沖洗
gelred 對(duì) DNA 和 RNA 的遷移影響極小
對(duì)核酸遷移的影響小于 SYBR Green I
gelred 與標(biāo)準(zhǔn)凝膠成像系統(tǒng)以及可見(jiàn)光激發(fā)的凝膠觀(guān)察裝置*兼容
使用 312nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)時(shí), GelRed 可以*的替代 EB ;使用 254nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)或可見(jiàn)光激發(fā)的凝膠觀(guān)察裝置時(shí), GelGreen 足以替代任意一種 SYBR 染料(見(jiàn)圖 4 中的光譜圖)
安全性測(cè)試 | ||||
SYBR Dyes | GelRed | GelGreen | ||
A) 5 min. incubation | 要想讓DNA染色劑安全,*的辦法就是設(shè)法不讓其穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活體細(xì)胞內(nèi),Biotium 做到了! | |||
B) 30 min incubation |
圖 3. 在37°C下,分別使用1X SYBR Green I, SYBR Safe, GelRed and GelGreen 對(duì)HeLa 細(xì)胞進(jìn)行孵化,并分別在5分鐘(A)和30分鐘(B)后觀(guān)察。實(shí)驗(yàn)顯示SYBR染料迅速進(jìn)入細(xì)胞并將細(xì)胞內(nèi)的核酸染成亮綠色(以上僅圖示 SYBR Green 1),而 GelRed 和 GelGreen 則因?yàn)椴荒艽┩讣?xì)胞膜而*沒(méi)有進(jìn)入細(xì)胞內(nèi), 足以證明GelRed和GelGreen是安全的。
圖 4. GelGreen (綠色) GelRed (紅色)在 PBS 緩沖溶液中結(jié)合 dsDNA 后的激發(fā)和發(fā)射光譜。 |
圖 5. 室溫下, GelRed TM ( 500 nm )和 SYBR Gold ( 488 nm )稀釋在 1 × TBE 凝膠染色液中測(cè)得的吸光度隨時(shí)間變化圖。 GelRed 和 SYBR Gold 初始的吸光度值分別為 0.029 和 0.051 。 |
Table B.以下標(biāo)簽可以*地配合以上產(chǎn)品使用:
Cat# | Product Name | Unit Size | 品 牌 |
31021 | 1 KB DNA Ladder (100ng/uL) | 30 ug/300 ul | Biotium |
31022 | Ready-to-Use 1 KB DNA Ladder | 150 applications (1.5 ml) | Biotium |
** 一次購(gòu)買(mǎi)5個(gè)包裝以上可獲得更優(yōu)惠價(jià)格,立刻我們的。 |
鄭重聲明:
凡是市場(chǎng)上聲稱(chēng)具有與Gelred和Gelgreen相同特性的 EB 替代品,且不指明是 Biotium 公司品牌的核酸染料,經(jīng)檢驗(yàn)都是通過(guò)Gelred或 Gelgreen稀釋后重新包裝的水貨,染色質(zhì)量遠(yuǎn)不及Biotium原包裝產(chǎn)品。我們鄙視這種損害客戶(hù)利益的行為,并堅(jiān)決打擊,發(fā)現(xiàn)一次我們將不再向其供貨! 在此,我們呼吁用戶(hù)在購(gòu)買(mǎi)Biotium公司產(chǎn)品時(shí), 請(qǐng)選擇正規(guī)經(jīng)銷(xiāo)商。