1.30%丙烯酰胺溶液
【配制方法】將 29g 丙烯酰胺和 1g N,N’- 亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為 60ml 的水中。加熱至 37℃溶解之,補加水至終體積為 100ml。用濾器(0.45μm 孔徑) 過濾除菌,查證該溶液的 pH 值應不大于 7.0,置棕色瓶中保存于室溫。
【注意】丙烯酰胺具有很強的神經毒性并可以通過皮膚吸收,其作用具累積性。 稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時應戴手套和面具。可認為聚丙烯酰胺無毒,但 也應謹慎操作,因為它還可能會含有少量未聚合材料。 一些價格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子,在丙烯酰胺貯存 液中加入大約 0.2 體積的單床混合樹脂(MB-1Mallinckrodt),攪拌過夜,然后 用 Whatman 1 號濾紙過濾以純化之。 在貯存期間,丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢轉化成丙烯酰和雙丙烯酸。
2.40%丙烯酰胺
【配制方法】把380g 丙烯酰胺(DNA 測序級)和20g N,N’- 亞甲雙丙烯酰胺溶
于總體積為 600ml 的蒸餾水中。繼續按上述配制 30%丙烯酰胺溶液的方法處理, 但加熱溶解后應以蒸餾水補足至終體積為 1L。
【注意】見上述配制 30%丙烯酰胺的說明,40%丙烯酰胺溶液用于 DNA 序列測定 。
3.放線菌素 D 溶液
【配制方法】把 20mg 放線菌素 D 溶解于 4ml 100%乙醇中,1: 10 稀釋貯存液, 用 100%乙醇作空白對照讀取 OD440 值。放線菌素 D(分子量為 1255)純品在水 溶液中的摩爾消化系數為 21,900,故而 1mg/ml 的放線菌素 D 溶液在 440nm 處 的吸光值為 0.182,放線菌素 D 的貯存液應放在包有箔片的試管中,保存于-20℃。
【注意】放線菌素 D 是致畸劑和致癌劑,配制該溶液時必須戴手套并在通風櫥內 操作,而不能在開放在實驗桌面上進行,謹防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。 藥廠提供的作治療用途的放線菌素 D 制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過測 量貯存液在 440nm 波長處的光吸收確定放線菌素 D 的濃度,這類制品便可用于 抑制自身引導作用。
4.0.1mol/L 腺苷三磷酸(ATP )溶液
【配制方法】在 0.8ml 水中溶解 60mg ATP, 用 0.1mol/L NaOH 調至 pH 值至 7.0, 用蒸餾水定容 1ml,分裝成小份保存于-70℃
5.10mol/L 乙酸酰溶液
【配制方法】把 770g 乙酸酰溶解于 800ml 水中,加水定容至 1L 后過濾除菌。
6.10%過硫酸銨溶液
【配制方法】把 1g 過硫酸銨溶解于終量為 10ml 的水溶液中,該溶液可在 4℃保 存數周。
7.BCIP 溶液
【配制方法】把 0.5g 的 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽(BCIP )溶解于 10ml 100%
的二甲基甲酰胺中,保存于 4℃
8.2×BES 緩沖鹽溶液
【配制方法】用總體積 90ml 的蒸餾水溶解 1.07g 鹽溶液 BES[N ,N-雙(2-羥乙 基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl 和 0.027g Na2HPO4 ,室溫下用 HCl 調節該溶液的 pH 值至 6.96、然后加入蒸餾水定容至 100ml,用 0.22μm 濾器過濾除菌,分裝成 小份,保存于-20℃。
9.1mol/L CaCl 2 溶液
【配制方法】在200ml 蒸餾水中溶解 54g CaCl2 ·6H2O,用0.22μm 濾器過濾除菌, 分裝成 10ml 小份貯存于-20℃。
【注意】制備感受態細胞時,取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至 100ml,用 Nalgene
濾器(0.45μm 孔徑)過濾除菌,然后驟冷至 0℃。